《表1 BSA及Fe3O4-BSA经过曲线拟合所得到的二级结构含量》

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《纳米粒子表面蛋白构象的交联质谱原位蛋白质组表征》

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图1A为Fe3O4纳米颗粒（300 nm，下同）、吸附了BSA的Fe3O4复合物及自由溶液中BSA（记为BSA）的ATR-FTIR谱图。由图1A可见，吸附了BSA的Fe3O4复合物和BSA在1500~1700 cm-1之间有两个明显的吸收峰。图1B为BSA及吸附在Fe3O4表面的BSA（记为Fe3O4-BSA）在1475~1740 cm-1的ATR-FTIR谱图，且对酰胺Ⅰ带（1700~1600 cm-1）进行了归一化处理，BSA的酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带分别位于1644.5和1515.3 cm-1处，而Fe3O4-BSA相应的峰位置发生了明显变化，且Fe3O4-BSA的酰胺Ⅱ带的相对峰强度显著低于BSA。酰胺Ⅱ带/酰胺Ⅰ带的比值（AⅡ/AⅠ）通常用于评价蛋白变性过程中二级结构的变化程度。当蛋白发生变性时，AⅡ/AⅠ比值增加，当肽段有序度（α螺旋和β折叠）增加时，该比值降低。由此说明，自由溶液中的BSA吸附到纳米材料表面后有序度提高。进一步对谱图中的酰胺Ⅰ带进行曲线拟合，分析BSA在两种状态下的二级结构信息（图1C和1D）。根据文献[18]报道，将酰胺Ⅰ带分配到每个成分峰，即β折叠（β-sheets）为1601~1617 cm-1（Inter-molecularβsheets）、1626~1643 cm!1和1681~1700 cm-1（Antiparallelβsheets）波段，β转角（βturns）为1664~1681 cm-1波段，α螺旋（α-helix）位于1658 cm-1附近，无规则卷曲（Random coil）为1644~1649 cm-1波段。每种二级结构的百分比如表1所示。低浓度的BSA（<1 mg/m L）在水溶液中呈现为无规则卷曲状态（21.3%），吸附到Fe3O4表面后，无规则卷曲转化为α螺旋（18.7%）和β结构（81.3%），有序度提高，与AⅡ/AⅠ结果相符。如文献[18]报道，无规则卷曲是一种不稳定的结构，吸附到材料表面后，BSA倾向于形成更加稳定有序的结构。由于聚集体的BSA富含β结构，由此推测，BSA在材料表面可能以聚集体的形式存在。