《表1 精子发生与精子形成相关基因的引物序列 (5′-3′)》

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《戊唑醇对秀丽线虫的生殖毒性作用》

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用Trizol法提取him-5（e1490）线虫的总RNA，然后逆转录成c DNA进行实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，q PCR）。引物根据线虫数据库的序列（http://www.wormbase.org）以及美国国家生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）进行设计，具体的引物序列见表1。反应体系为:SYBR Green I Master Mix 8μL，SYBR Green I Master Plus 2μL，上、下游引物（10μmol/L）各1.2μL，去离子水6.6μL，c DNA1μL，组成20μL反应体系。根据引物序列确定退火温度，扩增步骤为94℃预变性5 min，94℃、5 s，52℃退火30 s（age-1，daf-2，daf-16基因）；或54℃退火30s（swm-1，spe-6，akt-1，spe-4，try-5，fer-1基因），采集荧光信号，40个循环；72℃、10 min延伸，act-1作为内参照，采用相对定量法测定精子发生相关nsulin/IGF信号通路基因daf-2，akt-1，akt-2，daf-16以及SWM-1信号通路基因try-5，spe-4，spe-6，fer-1的m RNA相对表达水平。每个基因设定3个平行样，实验重复3次。