《表1 引物序列：小鼠卵泡内M-CSF和NPPC的表达情况及相互影响》

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《小鼠卵泡内M-CSF和NPPC的表达情况及相互影响》

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培养0.5、1、2、4h时收集空白对照组、HCG组、M-CSF组的卵泡，采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测空白对照组和HCG组小鼠卵泡中M-CSF、M-CSFR和NPPC mRNA表达水平以及M-CSF组小鼠卵泡中NPPC mRNA表达水平。在培养2h时收集GW2580组和M-CSF+GW2580组的卵泡，采用荧光定量PCR法检测小鼠卵泡中NPPC mRNA表达水平。荧光定量PCR法具体如下：采用Trizol法提取细胞总RNA，分光光度计检测RNA浓度及纯度，并逆转录为cDNA。采用SYBR Green荧光染料荧光定量PCR法扩增，20μl体系（SYBR荧光染料10μl、上下游引物各0.5μl、DEPC水8μl、cDNA 1μl）。内部参照管家基因选择Rpl19。引物设计采用Rrimer Primer 5.0软件包，具体设计信息见表1。扩增条件为95℃预变性30s，随后95℃5s，60℃20s，40个循环，采用相对定量2-ΔΔCt计算基因表达水平。所有检测至少进行3次。