《表1 PCR引物：铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-Ⅰ)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导脾细胞因子基因变化的研究》

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《铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-Ⅰ)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导脾细胞因子基因变化的研究》

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用DNA抽提试剂盒提取小鼠脾细胞DNA。以提取的DNA为模板，PCR扩增INF-γ、IL-12、IL-4、IL-17和Foxp3基因，引物由上海生工公司合成（表1）。50μl反应体系：2×PCR Master 25μl、上下游引物各2μl、DNA模板2μl、灭菌双蒸水19μl。PCR扩增条件：（1）INF-γ：95℃5min；94℃45s，55℃45s，72℃1min，共30个循环；72℃8min；（2）IL-12:94℃30s；94℃5s，60℃5s，72℃30s，共40个循环；72℃10min；（3）IL-4:95℃2min；95℃30s，55℃1min，72℃30s，共40个循环；72℃2min；（4）IL-17:94℃3min；94℃30s，61℃30s，72℃40s，共35个循环；72℃5min；（5）Foxp3:95℃1min；95℃5s，60℃5s，72℃30s，共46个循环；72℃10min。取5μl PCR产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。