《表3 LEAP孵育体系：SLFN14抗LINE-1分子机制研究》

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《SLFN14抗LINE-1分子机制研究》

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HeLa细胞铺10 cm细胞培养皿，24 h后转染。继续培养48 h后收取细胞。加入细胞裂解液裂解1 h后离心20 min，收集上清液。配置50 mL 8%和16%的蔗糖溶液（1 mol/L NaCl 1.6 mL，0.1 mol/L MgCl22.5 mL，1 mol/L Tris-HCl(pH 7.5）1 mL，1 mol/L DTT 50μL，蛋白酶抑制剂1片，无RNA酶水45 mL及4 g或8 g蔗糖)。随后将配制好的蔗糖溶液加入到超速离心管中，上层加入裂解液，4℃超速离心41，000 r/min，3 h。超速离心后用100μL无RNA酶水溶解离心管底部样品，1∶1加入甘油，–20℃保存。取一部分样品定量后，取适量样品加入到49μL LEAP反应体系中，反应体系组分见表3。37℃孵育1 h，将反转录后的cDNA进行Real-time PCR扩增，测定各组cDNA量。LEAP实验所需引物序列见表4。