《表1 PCR扩增引物：新疆乌苏天山山地南坡草原革蜱中立克次体感染调查及遗传进化分析》

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《新疆乌苏天山山地南坡草原革蜱中立克次体感染调查及遗传进化分析》

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根据文献报道，选择属特异的引物检测不同病原体，具体引物序列见表1．反应体系中，含有15μL 2×Es Taq MasterMix、DNA模板3μL、上下游引物各1μL（10μmol/L），加无菌去离子水至30μL．扩增条件为95?C预变性5 min后，以95?C变性45 s、55?C退火30 s、72?C延伸1 min，循环30次．最后72?C总延伸10 min．除贝氏柯克斯体的退火温度为61?C外，其他扩增条件不变．除埃立克体、查菲埃立克体、无形体、嗜吞噬细胞无形体、利什曼原虫、恙虫立克次氏体、伯氏疏螺旋体有二轮扩增外，其他均为一轮扩增．二轮扩增条件除埃立克体的退火温度为42?C外，其余与第一轮条件一致．1%琼脂糖凝胶电泳（100 V，20 min）PCR产物，凝胶成像仪下观察．PCR产物送往生工生物工程（上海）股份有限公司测序，将测序结果与美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库中序列信息进行比对，选取同源性较大的相应基因序列使用MEGA(7.0）软件进行同源性分析并构建系统进化树．