《表1 氮源对米曲霉形态和L-苹果酸生产的影响》

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《米曲霉形态对L-苹果酸生产的影响》


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采用单因素实验在摇瓶中研究有机氮源和无机氮源对A.oryzae发酵过程中形态和产酸的影响(表1)。结果发现,当以胰蛋白胨和大豆蛋白胨为氮源时,产酸和菌体生长均好于其余氮源。研究发现,氮源种类对A.oryzae菌体形态有显著的影响,除尿素以外,其他所有氮源都能使A.oryzae在培养基中形成数量、大小都不同的菌球。氮源对A.oryzae形态和L-苹果酸生产的影响如表1所示。当黄豆粉为氮源时,菌球浓度、菌球直径、单位体积发酵液菌球总体积(V值)比胰蛋白胨时分别提高4.90%,4.22%和18.9%;比大豆蛋白胨时分别提高114.0%、28.0%和347.1%。当氮源为黄豆粉和胰蛋白胨时,菌体质量浓度(以干质量计算)在15~16 g/L左右。当大豆蛋白胨作为氮源时菌体质量浓度达到最高(23.7±0.74)g/L。当氮源为胰蛋白胨时,L-苹果酸产量和得率比大豆蛋白胨时分别提高22.3%和36.6%;比黄豆粉为氮源时分别提高58.8%和19.1%.但是,以大豆蛋白胨为氮源时,葡萄糖消耗比胰蛋白胨和黄豆粉时分别高出10.7%和49.2%。因此,胰蛋白胨是最佳有机氮源。此外,无机氮源的添加不利于A.oryzae的生长和L-苹果酸的积累。当氮源为尿素时,A.oryzae在发酵液中以大量菌丝和少量菌球状呈现(图1)。以(NH4)2SO4和NH4Cl为氮源时,菌球浓度分别为(110±6)个/mL和(86±4)个/mL,菌球直径分别为(0.625±0.01)mm和(0.652±0.01)mm,V值均不超过15.0 mm3/mL。以(NH4)2SO4为氮源时,菌体质量浓度比尿素和NH4Cl时分别提高125.0%和4.85%。以NH4Cl为氮源时L-苹果酸产量比尿素和(NH4)2SO4时分别提高13.8%和5.60%。尿素为氮源时葡萄糖消耗比(NH4)2SO4和NH4Cl为氮源时分别高出36.7%和27.1%。然而,当NH4Cl和(NH4)2SO4为氮源时得率比尿素时均提高47.4%。所以,NH4C为最佳无机氮源。结果表明,以胰蛋白胨为氮源时,菌球浓度、菌球直径、V值、菌体质量浓度、L-苹果酸产量、葡萄糖消耗和产率比NH4Cl为氮源时分别提高137.2%、81.7%、1 329.0%、158.9%、303.0%、101.5%和100.0%。表明有机氮源促进菌体生长、L-苹果酸积累和葡萄糖消耗并提高产率。因此,胰蛋白胨是最佳氮源。