《表2 各种转运蛋白基因的特异性引物》

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《石油降解菌HX-2耐盐机制及甜菜碱转运蛋白基因的研究》

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注：下划线表示限制性内切酶位点.

对HX-2进行RNA提取并对甜菜碱合成相关基因BetB及4种甜菜碱合成蛋白基因H0、H1、H3、H5的转录水平进行分析，基因对应的GenBank登录号分别为MN567073、MN567074、MN567075、MN567076、MN567077。HX-2在不同条件下生长（LB培养基中额外添加0%、2%、4%、6%、8%、10%NaCl和150 mg/L甜菜碱），根据文献[41]的方法对RNA进行提取和qPCR的测定。在对数生长期收集菌体，并根据RNAprep细胞/细菌试剂盒说明书提取总RNA。通过使用Qubit分光光度计测量分离物质的总RNA浓度。利用TOYOBO qPCR试剂盒，使用500 ng RNA作为模板进行第一链c DNA的合成并建立20μL反应体系。通过qPCR仪进行转运蛋白基因的转录分析，每种转运蛋白基因的特异性引物列见表2。q PCR反应体系：IQTM SYBR?Green Supermix 10μL，c DNA2.0μL，引物F和引物R（10μmol/L）各0.4μL，加入DEPC水至20μL。qPCR反应条件：95°C 3 min；95°C 30 s；61°C 20 min；95°C 30 s；95°C 5 s；55°C 10 s；74°C 15 s，43个循环；72°C 5 min，20°C 30 s。使用16S rRNA基因标准化作为内部参考对照，根据2-ΔΔCt方法[42]分析实验数据。