《表1 不同浓度尿素溶解超声沉淀溶解率和蛋白质回收率》

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《易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒的纯化》

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由于重组HBcAg-X蛋白存在于超声沉淀，我们用含有不同浓度尿素的PBS重悬沉淀，结果显示，0.5mol/L尿素仅溶解了少量目的蛋白，而1mol/L、2mol/L、4mol/L尿素都有效溶解了目的蛋白（图2a、表1）。尿素溶解后上清经蔗糖密度梯度超速离心，以此初步分析重组蛋白是否以VLPs形式存在。结果显示，重组目的蛋白主要聚集于蔗糖梯度的第7、8、9层，与我们常规制备的HBcAg VLPs经典行为一致，提示4种浓度尿素能够使VLPs从沉淀中溶解分散出来，但4mol/L尿素条件下，2、3、4层有大量蛋白质聚集，提示VLPs的颗粒结构被破坏（图2b）。电镜结果进一步证实超声沉淀的尿素溶解样品中有VLPs存在，其中0.5mol/L尿素因未能充分溶解沉淀，VLPs极少，而1mol/L、2mol/L尿素背景下VLPs较多且颗粒形态完整，4mol/L尿素下VLPs结构形态有所损害（图2c）。此结果与蔗糖密度梯度离心结果相符。基于1mol/L、2mol/L尿素背景都能够有效解除VLPs聚集且保持良好的VLPs形态，而4mol/L尿素虽然溶解性好，但对VLPs结构有损害，因此，在后续的纯化中我们以含1mol/L尿素的PBS为聚集的重组蛋白的重悬缓冲体系。