《表3 重悬洗涤缓冲液对菌落数的影响》

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《构建噬菌体展示抗体库过程中电穿孔法的条件优化》


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有报道[7]称,在感受态制备过程中,用甘油/甘露醇洗涤细胞可以显著提高电转化效率。基于此,我们设置三组实验,A组设置为TG1 OD600=0.5时开始制备感受态细胞,用甘油/甘露醇重悬洗涤细胞[7];B组设置为TG1OD600=0.5时开始制备感受态细胞,用超纯水重悬洗涤细胞;C组将TG1培养至2.4.1优化后的OD600值(0.8),用超纯水重悬洗涤细胞。电转化结果见表3和图6,仅TG1 OD600值有差异而其它条件一致时,C组的转化子数和电转效率均高于B组,提示优化的OD600=0.8确实适用于TSL-pCANTAB 5E的电转化。A组(甘油/甘露醇)的电转效率最低(3.6×108CFU/μg DNA),C组(超纯水)的电转效率高达3.68×109CFU/μg DNA,电转效率提升将近10倍,提示甘油/甘露醇洗涤不适用于本实验的感受态细胞制备,因此确定为用超纯水洗涤感受态细胞。