《表1 SDS-PAGE电泳凝胶各组分质量分数》

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《基于乳酸-LDH的牦牛肉NADH线粒体介导再生研究》

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参照文献[16]的方法稍加改进。取切碎后的肉样100 g，在4℃预冷的300 m L提取液（含1 mmol/L EDTA、10 mmol/L pH值8.0 Tris-HCl、25 g/L Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚）)中混合，在低温高速冷冻离心机中13 000 r/min均质30 s，取出匀浆液，将其在9 500 g、4℃下离心10 min，取上清液，用滤纸过滤后得到Mb粗提液。采用硫酸铵溶液对粗提液进行分级沉淀，饱和度梯度由65%至95%，然后4℃条件下3 000 g离心10 min后弃去上清液，将沉淀物在5 mmol/L pH值8.5的Tris-HCl缓冲液中溶解。用提前预冷至4℃的相同缓冲液透析10 h，透析液每隔1 h换一次，透析结束后在4℃下5 000 g离心10 min，得到Mb初级纯化液。接下来的精细纯化采用Sephadex G-100型凝胶层析分离柱进行。收集540 nm波长下吸光度较高的蛋白溶液，参照文献[17]的方法对分离得到的Mb进行光谱特性和SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）鉴定，如表1所示。