《表5 已知浓度占比混合样本三次测序检测结果》

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《高通量二代测序基因条形码技术在动物源性制品物种鉴定中的应用》

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不同物种基因组DNA按已知比例进行混合。原液浓度分别为马、山羊（100 ng/μL），猫、牛（50 ng/μL），猪、绵羊（25 ng/μL），火鸡、鸡（5 ng/μL），鹅、鸭（1 ng/μL）。每个物种DNA各取10μL，则混合液中10个物种DNA终浓度分别为马、山羊（10 ng/μL），猫、牛（5 ng/μL），猪、绵羊（2.5 ng/μL），火鸡、鸡（0.5 ng/μL），鹅、鸭（0.1 ng/μL）。混合液中各'物à?种间DNA比€?'例为100:50:25:5:1。充分混匀后单独进行三次测序检测鉴定实验。实验结果显示（表5），山羊、猫、猪、火鸡的预计占比分别为27.62%、13.81%、6.91%和1.38%，而三次平行检测结果平均值分别为24.53%、15.88%、5.03%和2.40%。各物种检测结果与预添加比例具有相对一致性。说明该方法不但能够区混合样本中物种成分，而且具备对每个组分含量进行初步定量检测的潜力。但实验中发现，该引物对不同物种靶基因扩增效率存在一定差异，这也导致同一浓度组的两个物种的实际检测占比与预添加占比产生一定差异，说明如果需要进行定量检测，则后续还需要对引物的扩增效率进一步优化。在1 ng/μL浓度水平的鹅、鸭两个预添加物种均未能检出，也证明了该二代测序物种鉴定方法存在最低检测下限。实验结果显示，当鹅和鸭的核酸在初始混合液中浓度为0.5ng/μL时，本测序方法无法得到有效的特异性物种信息。