《表3 胚胎冷冻保存方案及活力评估举例》

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《生殖细胞及胚胎冻存技术发展及展望》

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LI Kang，et al[45]评估了萤火虫Coleoptera:Lampyridae胚胎玻璃化冻存的三种平衡过程，认为通过三步平衡法并使用添加0.5 mol·L-1海藻糖的冷冻保护剂可以得到更高的胚胎存活率（71.8±2.7）%。GUIGNOT，et al[46]研究了西方蜜蜂Apis mellifera胚胎的冷冻保存方法，比较了低温保存前胚胎制备的三个不同条件，并收集了冬季和春季的蜜蜂胚胎，结果显示超声波导入法处理胚胎细胞可以使孵化率达到25%，并认为季节对胚胎冷冻保存起到一定影响作用。在海洋无脊椎动物胚胎冻存研究中，确定冷冻保护剂的组合方式同样是至关重要的。PAREDES，et al[47]对海胆Paracentrotus lividus胚胎的低温保存研究首次寻找到适合冷冻海胆卵细胞和胚胎的冷冻保护剂组合，并确定了可以得到更高孵化率的慢速冷冻速率。他们认为最有效的冷冻保护剂组合是1.5 mol·L-1二甲基亚砜加0.04 mol·L-1海藻糖，通过4℃初始保持2 min，然后以-1℃·min-1冷却至-12℃，此时加入胚胎，保持2 min，再以-1℃·min-1至-80℃下进行第二次冷却，最后保持2 min后，将冷冻管转移到液氮中储存，获得了较为理想的冻存效果。PAREDES，et al[48]还认为，配制海胆胚胎冷冻保护剂需要区别于其他海洋无脊椎动物，不应该使用超纯水作为溶剂，使用超纯水的实验组解冻后的胚胎孵化率为零。目前研究报道的部分胚胎冷冻保存方案和活力评估数据见表3。