《表1 精子冷冻保存方案及活力评估举例》

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《生殖细胞及胚胎冻存技术发展及展望》

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慢速冷冻法也广泛应用于其他海洋无脊椎动物精子冻存中。使用二甲基亚砜作为冷冻保护剂，-6℃·min的速率降到-80℃，再以10～15℃·min-1的速率复苏到室温，可以得到13%～33%的海胆Pseudocentrotus depressus受精率[17]；使用同样的方法保存紫海胆Anthocidaris crassispina精子，得到10%有活力的精子[18]。改变降温速率和复苏方式可以提高受精率，同样使用二甲基亚砜作为冷冻保护剂，保持在液氮上方6 cm处，37℃水浴复苏后得到76%有活力的仿刺参Apostichopus japonius精子[19]，5%二甲基亚砜+1 mol·L-1海藻糖；在液氮中保持15 min；25℃，30 s水浴复苏，得到89%有活力的珠母贝精子[20]。选择合适的冷冻保护剂可以提高冻存效率，添加0.5 mol·L-1的海藻糖，浓度为12%的二甲基亚砜作为冷冻保护剂，绿唇贻贝Perna canaliculus精子解冻后具有高达60%的受精率，而采用6%二甲基亚砜加1%甘氨酸作为保护剂，可以将受精率进一步提高到84%[21]。目前研究报道的部分冷冻保存方案和活力评估数据见表1。