《表2 等电聚焦参数：砂藓总蛋白质提取方法的选取及双向电泳体系的建立》

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《砂藓总蛋白质提取方法的选取及双向电泳体系的建立》

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第一向等电聚焦电泳（isoelectric focusing，IEF）的等电聚焦系统为GE Healthcare Ettan IPG phor3。选用24 cm IPG胶条，将蛋白质样品与水化液（7 mol/L尿素，2 mol/L硫脲，2%v/v CHAPS，65 mmol/L DTT，0.5%v/v IPG Buffer，0.002%溴酚蓝）充分混合，终体积为450μL，在20℃条件下开始等电聚焦（表2），聚焦完毕后将胶条进行平衡，首先加入10 m L的SDS平衡缓冲液Ⅰ（6 mol/L尿素，75 mmol Tris-HCl pH值8.8，29.3%v/v甘油，2%v/v SDS，0.002%溴酚蓝，1%w/v DTT），混匀后平放在摇床上平衡15 min，倒出缓冲液在滤纸上胶面朝上沥干缓冲液后向其再次加入SDS平衡缓冲液Ⅱ（6 mol/L尿素，75 mmol Tris-HCl pH值8.8，29.3%v/v甘油，2%v/v SDS，0.002%溴酚蓝，2.5%碘乙酰胺），再平衡15 min。平衡结束后进行第二向垂直SDS-PAGE电泳，使用GE Healthcare Ettan DALTslx电泳系统。SDS-PAGE胶浓度为12.5%，厚度为l mm。冷凝系统温度设为15℃，开始功率为3.5 W/gel，待溴酚蓝浓缩成一条线并距离IPG胶条2 cm左右，加大功率至17.5 W/gel，待溴酚蓝指示剂与底部边缘距离2 cm左右电泳结束。