《表2 等点聚焦参数:沙棘果肉与种子蛋白双向电泳-质谱体系建立》

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《沙棘果肉与种子蛋白双向电泳-质谱体系建立》


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等电聚焦胶条采用24 cm、pH 4~7的IPG预制干胶条,水化体积500μL。水化方式采用主动水化,条件为50 V、15℃、14 h(表2)。胶条平衡与SDS-PAGE将聚焦完成的胶条用滤纸吸干矿物油后放入含有0.2 g/m L DTT的平衡液中平衡15 min,然后再置于0.2 g/mL碘乙酰胺中平衡15 min。平衡液:6 mol/L尿素,20%(V/V)甘油,2%SDS,50 mmol/L Tris-HCl(pH=8.8,1.5 mol/L)。将平衡后的胶条转移到12%浓度的二维胶上进行恒流电泳,参数为10mA/gel15min,30mA/gel直至溴酚蓝移动到胶条的最低端。