《表1 PMA-q PCR、q PCR对E.a死活菌混合样品的检测结果比较》

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《梨火疫病菌活菌快速定量检测方法的建立》

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对不同比例的死菌体、活菌体混合液进行PMA-q PCR检测，同时采用常规的q PCR对照，验证该体系对死活菌混合样品的选择性扩增。结果显示（表1），当样品全部为死菌体时（活菌体比例为0%），不加PMA的常规q PCR的Ct值为21，而PMA-q PCR的Ct值为30.22，差异极显著（p<0.01）。当样品中活菌体的比例为10%～100%时，随着活菌体比例的增加，PMA-q PCR的Ct值逐渐减小，而常规q PCR不能区分死、活菌是否均能扩增，Ct值无明显变化，q PCR样品检测的Ct值均小于PMA-q PCR。当活菌体比例为10%～100%（浓度为6.0×107～6.0×108CFU·m L-1)，PMA-q PCR所测得的活菌数与理论活菌数值均在同一个数量级，二者无显著性差异，具有良好的线性关系（图6）。结果表明，对于死菌体和活菌体液同时存在的混合液，采用PMA-q PCR检测，能完全抑制混合液中死菌体DNA的扩增，而对活菌体DNA的扩增无影响，仅以活菌体DNA为靶标进行选择性扩增，可以客观地反映样品中的活菌数，从而消除常规q PCR检测中由于死菌体扩增造成的的假阳性。