《表4 不同血清型EHDV荧光定量RT-PCR检测体系的特异性试验》

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《流行性出血病病毒(EHDV)血清型特异性荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用》

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为确保EHDV血清型q RT-PCR方法的特异性，针对每一种EHDV血清型，我们设计出了多对PCR扩增引物与探针，首先通过荧光染料法q PCR(SYBR Green）进行PCR扩增引物特异性验证。发现设计的EHDV血清型PCR扩增引物与BTV、CHUV和AKAV等病毒的c DNA均无扩增反应，但EHDV-6型扩增引物与EHDV-8型c DNA之间，EHDV-2型扩增引物与EHDV-7型c DNA之间，存在微弱交叉扩增反应。通过对引物的筛选，我们最终筛选出了8对高度特异性的EHDV血清型特异性PCR扩增引物。在确保引物特异性的前提下，我们进一步验证了探针与对应引物组合的特异性，结果显示建立的EHDV血清型q RT-PCR具有高度的特异性，每种EHDV血清型q RT-PCR引物（表2）仅与对应血清型EHDV毒株的核酸产生扩增曲线（表4）。