《表1 抗体稀释比：C-藻蓝蛋白抑制TGF-β1诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化》

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《C-藻蓝蛋白抑制TGF-β1诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化》

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处于对数生长期的Caski细胞无血清饥饿处理12 h后，按1.2所述进行分组加药处理，培养48 h后收集各组细胞，用PBS冲洗，加入含有PMSF和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液，冰上裂解细胞30 min，4℃条件下以12 000×g离心15 min后，取上清液，用BCA试剂盒测定蛋白浓度。蛋白样品按加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液后100℃加热10 min变性。每孔取30μg样本蛋白上样，浓缩胶层80 V恒压电泳，待样品到达分离胶层时调至140 V恒压电泳，溴酚蓝作为指示剂到达分离胶底部时，停止电泳，关闭电源。300 mA恒流转膜40 min电转至PDVF膜上，5%脱脂奶粉室温摇床上封闭2 h。孵育一抗，4℃孵育过夜（>12 h），用TBST洗涤3次后，加入HRP标记的山羊抗兔二抗室温孵育1 h，抗体稀释比详见表1。TBST洗涤3次。暗室中采用ECL试剂盒和凝胶成像系统发光成像，Image J软件分析条带灰度值，以目的蛋白条带灰度值与β-actin条带灰度值的比值表示蛋白相对表达量。