《表1.MS p80的Overlap PCR扩增引物》

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《基于脂蛋白P80的滑液支原体抗体ELISA检测方法的建立及应用》

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先用7对引物分别扩增获得MS p80的7个分段片段，PCR体系（40μL）:Prime STAR MAX Premix（2×）20μL，上、下游引物各0.2μmol/L，MS WVU1853基因组DNA模板100 ng，ddH2O补足至40μL体系。PCR条件为98°C 5 min；98°C30 s，55°C 5 s，72°C 5 s，35个循环；72°C 10 min。将7个分段产物回收后混合作为模板，进行第二轮PCR，扩增体系和反应条件同上。将获得产物进行1%琼脂糖凝胶电泳后切取与预期大小相符片段回收，即为MS p80基因全长。