《表1 纯化的THOC1-THOC2-THOC3样品蛋白质组分质谱分析结果》

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《人源THOC1-THOC2-THOC3亚复合物的电镜结构研究》

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THOC1、THOC2、THOC3亚基在哺乳动物和酵母中均非常保守，但是组分之间的相互作用尚不清楚（图1A）；人源THOC2全长为1 593个氨基酸，在进行全长蛋白的外源表达过程中，未能检测到蛋白表达（数据未显示）。通过在线软件FoldIndex[26]对THOC2折叠倾向性进行预测分析发现，在THOC2的C端存在一段很大的无序区域（氨基酸残基：1 191～1 593）（图1B），因此截取THOC2（氨基酸残基：1～1 190）进行外源表达；THOC1和THOC3则选择全长进行表达。THOC2的N端带有10×His标签，THOC1的C端带有Strep标签，用于两步亲和层析。第一步通过Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白质带有少量的杂蛋白质，经过第二步Strep-Tactin亲和层析后得到纯度较高的目的蛋白质样品（图1C）。为了提高样品的均一性，目的蛋白质样品通过Superose 6 Increase10/300 GL进一步分离提纯（图1D），收集所有的流出组分，经SDS-PAGE鉴定（图1E），合并含有目的蛋白质复合物的组分。纯化的样品经过LC-MS/MS鉴定，结果表明纯化所得的样品是THOC1-THOC2-THOC3亚复合物（表1）。经过整个分离纯化步骤，从300 mL的High Five细胞里可纯化出约1 mg的目的蛋白质复合物。