《表2 Au EH2及Au EH2A250H的动力学参数》

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《定点突变提高环氧化物水解酶AuEH2催化对甲基苯基缩水甘油醚的对映选择性》

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重组菌E.coli/aueh2A250H经IPTG诱导表达，超声波破碎细胞后，上清液采用Ni-NTA柱纯化获得目的蛋白。SDS-PAGE分析结果显示，纯化的Au EH2和Au EH2A250H在44.3kDa处呈现单一条带（图3）。纯化后的Au EH2A250H催化rac-p MPGE的比活力为4.48U/mg，较Au EH2降低50%。动力学常数结果显示，对于（S）-p MPGE，Au EH2A250H的Km值较Au EH2均有所下降，表明突变子对（S）-p MPGE的亲和力皆有所提高，并且其催化效率（kcat/Km）较Au EH2提高；对于（R）-p MPGE，Km值较Au EH2基本保持不变，但由于其kcat值降低，导致其催化效率（kcat/Km）较Au EH2降低，从而提高其对映选择性（表2）。Au EH2A250H的区域选择性系数βS和βR分别为>99.9%和98.7%，表明Au EH2及其突变酶均主要攻击（S）-p MPGE和（R）-p MPGE的少取代基Cβ，生成相应构型的邻二醇（图4）。