《表2 候选琥珀蚕内参基因扩增效率的标准曲线方程Table 2 Standard curve equations for amplification efficiency of Antheraea a

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《琥珀蚕内参基因的克隆及表达稳定性检测》

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1) y为扩增获得的Ct值，x为每个样品浓度的对数。2) 扩增效率通过公式E=10-1/slope（式中slope表示曲线斜率）计算获得。1) Ct value of each template gradient dilution was represented by the y-axis，and logarithm of concentration of every template gradient dilution

以获得的β-actin、18S rRNA和GAPDH基因全长c DNA序列为模板，设计引物Primer2（表1）进行PCR扩增，分别获得大小为665 bp、933 bp和440bp的片段。PCR产物通过胶回收后用BIOMATE3S分光光度计检测回收产物的质量浓度分别为77ng/μL、140 ng/μL和46 ng/μL。分别以梯度稀释后的PCR产物为模板，用表1中的qRT-PCR引物进行PCR扩增。以扩增获得的Ct值为纵坐标（y），以稀释后每个样品浓度的对数为横坐标（x），在Excel软件中经对数拟合作图，得到标准曲线方程（表2）。