《表1 用于检测Rht B1-b、Rht D1-b及Rht8的分子标记》

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《黄淮南片麦区新育成品种(系)中3个矮秆基因分子标记检测及其与农艺性状的关系》


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试验所用的Rht B1-b和Rht D1-b的分子标记参照Ellis等[12]提供的引物序列,根据携带Rht B1-b和Rht D1-b基因的农林10号作为阳性对照,Rht8分子标记参照Ellis等[6]发表的SSR引物Xgwm261,其阳性对照为Akakomugi,在该材料中可扩增出192bp的DNA片段。引物由北京擎科新业生物技术有限公司合成,根据其分子量将引物稀释至10μmol/L,PCR的反应体系为10μL:2×TSINGKE Master Mix5μL,引物各0.5μL,DNA模板1.0μL,dd H2O 3.0μL,PCR反应条件为:95℃预变性4min;95℃30s,退火30s(退火温度参照表1),72℃延伸1min,共35个循环;72℃延伸7min。反应完成后利用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测,经银染脱色后在日光灯下进行观察读带,使用标准分子量MarkerⅠ[天根生化科技(北京)有限公司,MD101]进行对照。