《表1 根据图2B的数据计算的肉桂醛的EC1.5》

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《基于ARE-Nrf2的皮肤致敏体外检测方法及其在样品检测中的应用》

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我们的操作规程参照了OECD TG 442D测试指南，但是由于使用的稳转细胞株发生了改变，因此需要确定最佳的实验条件。首先进行铺板密度的确认:将细胞以不同的数量接种到96孔板（0.0625-6×104个细胞/孔），使用64μmol/L的肉桂醛暴露48 h，检测肉桂醛的最大诱导倍数，结果如图2A所示，64μmol/L肉桂醛的诱导倍数在接种量大于1×104个细胞/孔时在2～8之间，并且，接种量在1×104个细胞/孔时，诱导倍数最大，表明在此细胞密度下检测的敏感性最高。这个结果与KeratinoSensTM的推荐实验条件是一致的，并且数值符合KeratinoSensTM可接受的标准。其次，荧光素酶试剂盒确认:我们使用了辉光型的荧光素酶试剂盒而非瞬时发光的荧光素酶试剂盒，虽然的荧光衰减随时间较为缓慢，但是不清楚是否会对最终的结果判定产生影响。为了确定在加入裂解液之后的不同时间读取数值对最终结果判定的影响，我们对同一样品进行不同时间点的数据读取，结果显示，随着时间的延长，样品的荧光强度会缓慢下降（图2B），但是对数据处理后的EC1.5影响不大（表1），不会影响到对结果的判定。