《表1 粘质沙雷氏菌膜结合GADH的纯化》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

粘质沙雷氏菌膜结合GADH的分离纯化结果如表1所示。Triton X-114相分离法是一种有效的膜蛋白提取方法。通过水相与去污剂相的分离，大部分的亲水性蛋白被去除，膜结合GADH被纯化了2.2倍，且具有较高的回收率。在利用盐析从提取膜蛋白中分离纯化GADH的过程中，硫酸铵饱和度为25%～45%时，沉淀的蛋白具有很高的GADH活性，而从其他饱和度下的沉淀物中基本检测不到GADH活力。经过盐析处理后，膜结合GADH被进一步纯化到3.3倍，同时除去了膜蛋白中的Triton X-114。利用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化盐析得到膜蛋白时，用含有0.1 mol/L KCl的缓冲液A洗脱的组分具有较高的GADH活性，其最大比活力为88.95 U/mg（图1）。经过阴离子交换纯化后，膜结合GADH的比活力提高至80.95 U/mg，纯化倍数增加至142.0倍。利用Hydroxyapatite Fast Flow层析对经过阴离子交换处理的膜蛋白进行纯化的过程中，用含有1 g/L Triton X-100、5 mmol/L MgCl2·6H2O和10 mmol/L D-葡萄糖酸钠的150 mmol/L的磷酸钠缓冲液（p H 7.0）洗脱的组分具有较高的GADH活性，其最大比活力为103.25 U/mg（图2）。经过上述纯化，获得了比活力为91.43 U/mg的粘质沙雷氏菌膜结合GADH，其最终的纯化倍数为160.4，回收率为3.8%。