《表1 MTHFR引物信息》

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《木犀草素与叶酸对黄曲霉毒素B_1致食管上皮细胞毒性及MTHFR基因高甲基化的影响》

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注：C’s.引物中非CpG岛的C的数目。

参照Zhu Yunyun等[1 9]的方法，略作改动。通过N C B I获得M T H F R基因序列及其启动子，利用C p G岛在线预测网站http∶//www.ebi.ac.uk/Tools/seqstats/embo ss＿cpgplot/预测其基因启动子区潜在的Cp G岛，该段序列相对于转录起始位点的位置为4 812～5 405 bp，长度为594 bp，共33个单位信息，覆盖49个位点（图1）。用EpiDesigner软件进行引物设计，引物（5’端：AGGAAGAGAGGGAAGTGGT-A G T TAT T G G G A G T TATAT T；3’端：C A G TA ATA C G A C T C A C TATA G G G A G A A G G C TA C A A C A C-AAAAACCCCCTACAC）（表1）。用DNA提取试剂盒提取各处理组细胞DNA，用NaHSO3处理待检测DNA样品。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）法扩增目的基因片段，扩增程序：94℃4 min；94℃20 s，56℃30 s，72℃60 s，45个循环；72℃3 min。虾碱性磷酸酶（shrimp alkaline phosphatase，S A P）混合液去除反应体系中游离的核苷酸，将PCR/SAP反应产物混合并在37℃孵育，进行3 h的体外转录和RNase A消化，随即进行芯片点样，用MALDI-TOF分析点样后的芯片，最后用EpiTYPERTM软件对原始数据进行评估和分析。