《表7 HBV组分蛋白对Hep G2细胞Id1、Id3启动子活性的比较分析》

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《乙型肝炎病毒复制对肝细胞Id家族表达的影响》

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用限制性内切酶KapnⅠ和XhoⅠ将构建出的p GL3-Id1启动子及p GL3-Id3启动子重组质粒进行双酶切后，1%琼脂糖凝胶电泳，分别得到2条约2 000 bp大小的条带，与预期结果一致，如图5所示。用DNAassist软件将测定的基因序列与GeneBank查找的启动子序列进行比对分析，结果表明所插入的序列与目的序列完全吻合，重组质粒构建成功。将HepG2细胞分别转染质粒pCMV-sport6、pCMV-sport6-HBV1.1、pCMV-sport6-HBs、pCMVsport6-HBp、pCMV-sport6-HBc、pCMV-sport6-HBx，并共转染PGL3-TK和PGL3-Id1启动子或PGL3-Id3启动子，48 h后检测各组报告基因与海参荧光素酶的荧光值，两者的比值反应目的启动子的相对活性，结果如图6、表7所示。HBV1.1组的Id1、Id3启动子活性较对照组分别下降了71.0%、50.2%，HBc组的Id1、Id3启动子活性较对照组下降62.2%、56.3%，HBp组的Id1启动子活性较对照组下降35.5%，差异均有统计学意义（F=16.530、5.210；tD=6.205、2.875、5.442、3.222、3.106；P=0.000、0.040、0.000、0.019、0.025）。进一步验证了乙肝病毒及其C蛋白对肝细胞Id1、Id3转录水平上的抑制作用。