《表2 BestKeeper软件分析看家基因的表达稳定性》

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《葡萄实时荧光定量PCR稳定内参基因的筛选和验证》

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本研究GeNorm软件配对变异值分析结果表明最适内参基因数目为3个，3个软件分析结果内参基因稳定性排名虽存在差异，但稳定性最好的前3个内参基因种类相同，均为GAPDH、UBQ-1和EF1α-1。这与已报道葡萄内参基因有所不同，目前已筛选出的葡萄最适内参基因组合包括：GAPDH+Actin+EF1-α+SAND、VvEF1-α+VvEF1r、EF1α+GAPDH、β-Actin+SAND以及18S-rRNA+GAPDH+Actin（Reid et al.，2006；代红军等，2016；查倩等，2016；周俊等，2016；许明等，2017）。在这些研究中，最适内参基因数目从2～4个不等，最适内参基因组合也各不相同，但GAPDH和EF1-α在多项研究中均被证明为较稳定的内参基因，本研究结果与之一致，3种软件分析GAPDH和EF1-α稳定性均位于前3位（表1；表2；图3）。而在已有研究中较为稳定的Actin基因（Reid et al.，2006；代红军等，2016），在本研究中稳定性较差，排在第10位，不建议作为葡萄内参基因（表1；图3）。这种差异一方面可能与材料类型相关，在已有研究中Actin基因多为在果实发育阶段表现稳定，本研究材料未包括果实，主要为叶片、枝条等营养生殖器官，因此Actin基因稳定性表现有所不同；另一方面，已有研究候选基因数目较少（4个或6个），因此Actin基因稳定性排名靠前，而本研究候选基因19个，因此筛选出了更多稳定性优于Actin的内参基因，如UBQ-1在本研究中稳定性排名为前3位，且与GAPDH和EF1-α在相关性强，因此最终确定GAPDH+UBQ-1+EF1α-1作为葡萄最适内参基因组合（表1；表2；图3）。