《表2 GeNorm、Normfinder、BestKeeper对10个内参基因表达稳定性分析》

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利用3个软件分别分析评估10个候选内参基因的表达稳定值,结果见表2.geNorm算法是根据所有候选基因的成对变异来计算各基因的表达稳定值M,M值越大,则表明内参基因越不稳定.geNorm计算结果表明,所有内参基因M值均低于阈值1.5,表现出较高的稳定性.稳定性排名靠前的5个基因性依次为α-Tubulin=AP-2>60SRP>EF1-α>UBQ.Normfinder算法则基于方差分析对内参基因稳定性进行排序,并引入不同样品组间表达差异.根据计算结果,最稳定的前5个基因性依次为60SRP>AP-2>α-Tubulin>EF1-α>GAPDH.BestKeeper软件根据导入的Cp值计算获得候选内参基因在所有样品中Cp值的标准差(SD),变异系数(CV)和基因间相关系数(r)等值.根据BestKeeper分析结果的SD值分析评估最稳定的前5个基因依次为UBQ>α-Tubulin>60SRP>EF1-α>SAND.通过3个软件计算得到的排名前5候选内参基因中,α-Tubulin、60SRP均是表达稳定性最高的两个内参基因,表明这2个基因在不同光质培养的DLR中表达较为稳定.3个软件分析出的最不稳定候选内参基因均为NAD5.