《表1 无毒基因Avr-Pia、Avr-Pita1和Avr-Pii扩增引物》

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《云南省元阳县籼/粳型稻瘟病菌无毒基因Avr-Pia、Avr-Pita1和Avr-Pii多样性分析》

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根据表1中无毒基因参考序列设计引物序列，由北京华大基因研究中心有限公司合成。20μL PCR反应体系：5×Buffer 4μL、dNTP 1μL、上下游引物（表1）各0.25μL、Go Taq G2 0.2μL、超纯水12.3μL、DNA模板2μL。扩增程序：95℃预变性2 min；95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸不同时间（表1)，35次循环；72℃延伸5 min。PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。基于Avr-Pita1外显子序列采用MEGA 7软件邻接法对稻瘟病菌菌株和Chuma et al.(2011）中参考菌株构建系统发育树并进行序列分析，Bootstrap设置为1 000(Kumar et al.，2016）。