《表1 蒜氨酸注射动物免疫程序》

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《蒜氨酸免疫毒性研究》

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注：a家兔为静脉注射，豚鼠为心脏注射；b家兔为大剂量，豚鼠为小剂量

动物由本校实验动物中心提供。参照文献[1，12-13]进行静脉用药、过敏反应与抗体制备等相关实验。（1）豚鼠分组及免疫处理。豚鼠40只，体重300～500g，分为4组，每组10只。第一实验组：按每只每次1 mL的剂量心脏注射100mg/mL蒜氨酸溶液，每2天注射1次，直至第二实验组完成末次注射。第二实验组：按表1进行常规免疫注射。第三组（阴性对照组）：按每只每次1mL的剂量注射生理盐水，注射次数和注射途径与第一实验组一致。第四组（阳性对照组）：注射30%鸡蛋清溶液，注射途径和剂量与第二实验组一致。（2）家兔分组及免疫处理。家兔40只，体重2～3kg，分为4组，每组10只。第一实验组：按每千克体重每次注射100mg蒜氨酸的剂量，静脉注射100mg/mL蒜氨酸溶液，每2天注射1次，直至第二实验组完成末次注射。第二实验组：按表1进行常规免疫注射。第三组（阴性对照组）：按每只每次1mL的剂量注射生理盐水，注射次数和注射途径与第一实验组一致。第四实验组（阳性对照组）：注射抗原为豚鼠血清，注射途径和剂量与第二实验组一致。（3）抗体检测及过敏反应检测。第二实验组末次注射7d后，采集每只动物心脏血2mL，用于抗体检测；以100 mg/mL蒜氨酸溶液、50%鸡蛋清溶液（或豚鼠血清），予以相应动物皮内注射0.1mL，注射后0.5h、72h观察局部皮肤反应情况；以100mg/mL蒜氨酸溶液1mL、50%鸡蛋清溶液1mL（或豚鼠血清1mL），予以家兔静脉注射、豚鼠心脏注射，观察过敏反应发生情况，如果0.5h内动物没有死亡，继续观察72h。（4）过敏反应检测判断标准[1，13-15]。（1）超敏反应：注射后立即观察结果，动物出现烦躁、耸毛、抓鼻、喷嚏、呼吸困难、抽搐、大小便失禁，甚至死亡，判为出现超敏反应。（2）速发型皮肤敏感实验：皮内注射后10 min观察结果。注射局部皮肤无改变，周围无红肿，或针刺部位出现小皮丘，周围无红晕，判为阴性。针刺部位出现皮丘，皮丘直径超过0.5cm，触感硬，或针刺部位出现红晕及风团，风团直径超过1cm，判为阳性。（3）迟发性皮肤过敏反应：皮内注射72h观察结果。注射局部皮肤无改变，周围无红肿，或注射局部出现红晕，硬结直径小于5mm，判为阴性。注射局部红肿，硬结直径大于5mm，判为阳性。注射局部红肿，硬结大于15mm，判为强阳性。