《表1 试验结果表：转基因莱茵衣藻中白藜芦醇的提取工艺》

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《转基因莱茵衣藻中白藜芦醇的提取工艺》

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注：±表示暂定的最佳试验方案；DW表示干重

使用Waters 1525高效液相色谱仪，并使用Angilent ZORBAX SB-C18 250 mm反相色谱柱进行检测，柱温设定25.0℃。高效液相色谱方法：流速0.8mL/min，流动相为甲醇（A）和水（B）。使用浓度为10%～70%的甲醇梯度洗脱30min，接着保持甲醇浓度70%洗脱10 min。白藜芦醇检测波长为305.6nm。白藜芦醇标品配制成100μg/mL的母液，然后稀释成5个浓度梯度：2.5、5、12.5、25、50μg/mL，过滤分装后进行超声除气泡并各取10μL依次进样，绘制标准曲线。根据孙同天的N+(N-1）规则进行试验设计[11]。共有4个因素，分别是：酶解时间、甲醇体积分数、提取温度和提取时间。每个因素分别进行了4个水平的检测。试验指标定为白藜芦醇提取浓度。通过查阅文献[12]，暂定本试验最佳的提取方案为：取一定量的莱茵衣藻进行9h酶解后超声萃取30min，接着用60%的甲醇溶液在60℃条件下提取6h（表1）。