《PCR技术实验指南》

第一章 PCR导论1

第一节 PCR实验室的建立4

第二节 标准PCR方法：β-珠蛋白DNA的快速分离和PCR分析10

第三节 PCR中遗留污染的酶法控制14

第四节 表面紫外线照射减少PCR污染19

第五节 PCR反应的特异性、效率和忠实性23

第六节 PCR的优化和疑难解析33

第七节 长距离PCR41

第二章 样品的制备52

第一节 用基因释放剂快速制备PCR扩增用的DNA53

第二节 石蜡包埋组织的PCR扩增：样品制备与固定的效果64

第三节 RNA纯化74

第三章 引物设计88

第一节 PCR引物设计的一般概念88

第二节 错配和简并引物的设计和应用95

第三节 多重PCR105

第四章 PCR产物检测：定量和分析117

第一节 PCR产物的免疫检测119

第二节 使用AmpliSensor分析的定量PCR131

第三节 用任意引物PCR进行DNA指纹分析138

第四节 用任意引物PCR进行RNA指纹分析145

第五节 原位PCR162

第六节 单链构象的多态性173

第七节 用异源双链体迁移率测定技术对人免疫缺陷病毒进行遗传亚型分类178

第八节 灵敏快速的突变检测方法--固相化学裂解法192

第五章 RNA样品的PCR201

第一节 PCR法测定基因表达的相对差异205

第二节 运用磷光剂驻存技术的定量液相杂交PCR218

第三节 用SNuPE法定量分析单个核苷酸差异的等位基因特异性序列238

第四节 内部外显子和3′末端外显子的捕捉241

第五节 表达PCR261

第六节 PCR的介导的克隆267

第一节 cDNA末端的快速扩增268

第二节 Panhandle PCR288

第三节 差异显示法检测和鉴定表达基因295

第四节 用磁珠和PCR构建减法cDNA文库310

第五节 PCR法筛选DNA文库321

第六节 YAC文库的自动化筛选327

第七节 PCR无限增殖法得到重排免疫球蛋白基因表达文库344

第七章 PCR测序359

第一节 PCR扩增DNA产物的直接测序359

第二节 循环测序法371

第八章 PCR产物的克隆380

第一节 PCR产物的克隆策略380

第二节 PCR产生的DNA片段的克隆和分析393

第九章 PCR法制备突变体416

第一节 致突变PCR416

第二节 PCR突变和体内重组421

第三节 PCR法构建突变基因及新型重组基因429

第四节 快速PCR定点突变437

第十章 其他扩增技术445

第一节 连接酶链式反应(LCR)450

第二节 3SR检测法的优化及特点467

第三节 单管定量NASBA检测HIV-1RNA478

附录487

用于引物选择的计算机软件487

PCR中使用的修饰寡核苷酸492

供应商496

商标499

索引503