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理论部分1

第二章 细胞的分化1

一、细胞分化的概念1

二、细胞分化的特征2

(一) 遗传性2

(二) 繁殖性3

(三) 组织特异性3

(四) 反分化3

(五) 组织功能特异化4

(六) 分化与适应的比较4

三、影响细胞分化的环境因素4

(二) 神经生长因子7

(一) 纤维母细胞生长因子7

(三) 上皮细胞生长因子8

(四) 血小板来源的生长因子9

四、细咆分化的分子机制10

(一) 分化细胞核的全能性11

(二) 动物器官的再生11

(三) 细胞核移植实验12

(四) DNA与RNA杂交实验12

五、细胞分化中基因表达的调控13

(一) 以基因表达为基础的细胞分化假说13

(二) 细胞分化中基因调控的实例15

(三) 正常分化的范例19

(一) 基因的丢失27

(二) 基因的修饰27

一、基因结构的调控27

第二章 真核细胞基因的调控27

(三) 基因的扩增和重排28

二、转录水平的调控28

(一) 启动子29

(二) 增强子30

(三) 转录的起始31

(四) 转录的终止32

三、转录后水平的调控33

(一) 戴帽和甲基化33

(二) PolyA尾巴的添加34

(三) RNA的剪接35

(四) 核和细胞浆间RNA的运输37

四、翻译水平的调控38

(五) mRNA在细胞浆内的稳定性38

(一) 翻译的起始调节39

(二) mRNA翻译的特异性40

(三) 翻译的起始因子41

五、翻译后水平的调控42

第三章 甾体激素对基因表达的调节45

一、甾体激素对靶细胞的作用45

(一) 甾体激素的血浆结合蛋白47

(二) 甾体激素进入细胞48

(三) 甾体激素与受体间的作用49

二、甾体激素对某些特异基因表达的调控53

(一) 雌激素对基因表达的作用53

(二) 糖皮质激素对基因表达的调控56

三、甾体激素—受体复合物与DNA之间的作用模型59

一、癌是基因疾病64

(一) 基因突变64

第四章 癌细胞基因表达的改变64

(二) 基因调控异常65

二、分化与反分化65

三、癌细胞的再分化66

四、癌细胞基因调控异常的分子机制70

(一) 癌变过程中基因转录的改变71

(二) 癌细胞基因转录后调控的改变73

(三) 癌细胞的翻译凋控74

五、基因表达的调控与癌变原理75

第五章 肿瘤基因襄型改变的例证81

一、肿瘤酶与同工酶活性变化的特点81

(一) 酶与代谢的不平衡81

(二) 胚胎型酶与同工酶的基因表达86

(三) 异位性同工酶的基因表达92

(四) 肿瘤组织特异酶93

(五) 肿瘤细胞膜上的酶及蛋白质的改变93

二、肿瘤酶与同工酶变化的机制94

(一) 抑制物或激活物的产生95

(二) 酶的合成与降解95

(三) 转录水平的凋控96

(四) 翻译水平的凋控97

(五) 基因扩增调节97

三、肿瘤酶与同工酶的临床应用98

四、肿瘤胚胎抗原的基因表达和临床应用99

(一) 甲胎蛋白99

(二) 癌胚抗原101

第六章 癌基因103

一、肿瘤病毒及癌基因103

(一) src基因家族106

(二) ras基因家族107

(三) myc基因家族107

(四) myb基因家族108

(五) sis基因109

(六) B1ym、fos，ski基因109

二、细胞癌基因109

三、细胞癌基因的致癌作用112

(一) DNA转化实验113

(二) 人类癌基因的鉴定113

四、原癌基因活化的机制119

(一) 肿瘤病毒插入细胞基因119

(二) 基因突变121

(三) 基因的易位121

(四) 基因扩增122

五、癌基因产物的功能以及对基因麦型的影响123

(一) 与酪氨酸蛋白激酶有关的转化蛋白124

(二) P21125

(三) myc基因的表达及其调控126

第七章 染色质的组成成分129

一、脱氧核糖核酸129

(一) DNA的高级结构130

(二) DNA顺序的类别130

(三) 真核细胞的基因组132

二、染色质蛋白质133

(一) 组蛋白134

(二) 非组蛋白142

(三) 磷酸化非组蛋白147

(四) HMG非组蛋白152

(一) 核小体的结构概况160

第八章 染色质的结构与功能160

一、染色质的基本结构单位——核小体160

(二) 核小体的DNA长度161

(三) 核心颗粒的形状163

(四) 核心颗粒中蛆蛋白的排列164

(五) 组蛋白H_1的位置164

二、染色质的二级结构——螺旋筒166

三、染色质的三级结构——套圈的形成168

四、组蛋白修饰对染色质结构的影响171

五、常染色质与异染色质172

六、染色质的转录活性173

(一) 核酸酶消化173

(二) 染色质DNase I超敏感区176

(三) 活性染色质的组蛋白及其修饰178

(四) 活性染色质非组蛋白179

(五) 活性染色质与基因的甲基化183

(六) 转录活性染色质的分级分离184

七、活性染色质的体外转录186

第九章 癌细胞核的异常191

一、癌细胞核的形态异常191

二、癌细胞的染色体192

三、癌细胞的特异核蛋白194

四、细胞癌变过程中核非组蛋白的变化196

五、癌细胞核非组蛋白磷酸化及DNA转录的变化199

六、致癌物导致细胞染色质结构的改变200

(一) DNA的修饰与核小体结构的改变200

(二) 染色质结构的变化201

一、染色质组分的组织和种属特异性205

第十章 肿瘤特异染色质组分及染色质结构的免疫学研究205

二、分化组织中的特异抗原206

三、肿瘤特异核抗原207

四、化学致癌过程中肿瘤特异核抗原的出现209

五、直肠肿瘤特异核抗原的某些特征210

六、测定核抗原的免疫学方法211

(一) 微量补体结合试验211

(二) 放射免疫测定211

(三) 酶联免疫测定(Elisa)211

(四) 免疫学定位212

(五) 特异抗体的制备212

一、DNA分子克隆214

(一) 分子克隆必需的酶214

第十二章 分子及细胞生物学新技术在肿瘤研究中的应用214

(二) 载体218

(三) 宿主222

(四) 基因库的建造223

(五) cDNA库的建造224

(六) 含有特异基因质粒克隆的筛选226

(七) 应用227

二、细胞融合232

(一) 细胞杂交和再造232

(二) 杂交细胞的筛选234

(三) 杂交细胞中基因表达的模式235

(四) 应用235

三、杂交细胞瘤——单克隆抗体的制备和应用236

(一) 单克隆抗体的制备236

(二) 单克隆抗体的特性238

(三) 应用240

实验部分241

第一章 体外转录与翻译的测定241

实验一 体外转录241

(一) 细胞核的分离243

(二) 体外RNA的合成(转录作用)244

(三) 特异RNA的杂交法测定250

实验二 特异信息核糖核酸的研究方法251

(一) 游离型多聚核糖核蛋白体的分离251

(二) 多聚核糖核蛋白体的免疫沉淀252

(三) 几种提取RNA的方法254

(四) 寡胸腺嘧啶纤维素层析柱纯化信息RNA258

(五) 信息RNA的分部分离259

实验三 体外mRNA的翻译262

(六) mRNA的鉴定262

(一) 麦胚无细胞蛋白质合成系统264

(二) 兔网织红细胞裂解液系统267

(三) 翻译反应中特定产物的鉴定269

实验四 DNA和RNA的体外放射性同位素标记271

(一) 双链DNA的缺口翻译标记法272

(二) 互补于RNA的放射性单链DNA(cDNA)的合成273

(三) ~(32)P末端标记的单链DNA的制备275

(四) DNA或RNA的放射性碘标记276

(五) 从克隆DNA中制备单链~(32)P标记的互补DNA277

实验五 核酸杂交反应279

(一) 放射性探针的制备280

(二) ~(32)P或~3H标记的cDNA与RNA的液相杂交280

(三) 固相化cDNA/RNA杂交反应——斑点印迹法282

(四) 细胞浆的斑点印迹杂交法285

(五) DNA—DNA的再聚反应286

第二章 基因工程289

实验六 分子克隆289

(一) 以限制性内切酶切割DNA片段289

(二) 以T_4DNA连接酶连接DNA片段291

(三) S1核酸酶裂解DNA单链末端及切开双链DNA发夹圈293

(四) DNA末端加上核苷酸同聚物294

(五) cDNA的合成及克隆297

(六) 重组DNA转化大肠杆菌310

实验七 DNA序列测定329

(一) Maxam—Gilberr法334

(二) Sanger链终止法343

(一) 肿瘤染色质抗原的提取及分部分离352

实验八 肿瘤抗原的免疫352

第三章 免疫鉴定352

(二) 染色质抗体的制备356

(三) 常规免疫法357

(四) IgG的纯化358

(五) 杂交细胞瘤制备单克隆抗体361

实验九 肿瘤特异抗原的免疫学测定365

(一) 补体结合试验365

(二) 琼脂双扩散试验368

(三) 火箭电泳369

(四) 放射免疫测定369

(五) 荧光及酶标抗体的制备371

(六) 核抗原的微量酶联免疫测定法(Elisa)376

(七) 免疫酶标定位377

(八) 免疫印迹定位技术378