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第一章 实验肿瘤研究简史1

第二章 肿瘤实验研究主要材料和方法7

第一节 肿瘤实验研究的意义和发展7

第二节 实验室常用动物的自发瘤及其应用7

一、两栖类自发瘤7

二、鸟类的自发瘤7

(三)金仓鼠8

(二)大鼠8

(一)小鼠8

三、哺乳类动物自发瘤8

(四)家兔9

第三节 诱发肿瘤的建立和应用9

一、诱发肿瘤的基本方法和途径9

二、诱发肿瘤的基本要求10

三、诱发肿瘤举例10

(一)食管癌模型的建立10

(二)肝癌模型的建立11

二、基因表达调控失常引起恶性变12

(三)肺部肿瘤模型的建立12

一、同种可移植性肿瘤13

(一)我国目前瘤株建立的单位和瘤株种类13

第四节 可移植性肿瘤模型的建立13

(二)町移植性肿瘤的建立方法18

(三)肿瘤移植方法18

(四)瘤细胞长期冷冻保存19

(五)瘤株保种传代的操作常规简介19

(六)瘤型和生物学特性在传代过程中的变化20

二、异种移植20

(一)裸鼠在肿瘤异种移植中的地位和应用20

一、无菌动物的基本概念22

二、无菌动物的产生和培育22

第五节 无菌动物在肿瘤研究中的应用22

(二)异种移植的其它方法22

三、无菌动物在肿瘤研究中的作用23

第六节 组织培养在肿瘤研究中的应用23

一、细胞和组织培养方法23

二、常用培养方法25

三、瘤细胞培养中的注意事项25

四、培养细胞生物学特性的检查26

五、单细胞分离培养法26

(一)总的方面26

第七节 器官培养技术在肿瘤研究中的应用27

一、概念27

二、常用的器官培养方法27

三、体内器官培养方法28

(一)DNA损伤试验29

四、肿瘤侵袭研究中体外球体培养模型的建立29

五、器官培养技术应用举例30

二、人类肿瘤病因实验研究简史33

第一节 导言33

一、肿瘤病因和流行病学研究的关系33

第三章 肿瘤化学(物理、激素、生物毒素)病因的实验研究33

第二节 体内实验34

一、被试物的选择和其质量的控制34

六、三个月亚急性实验35

三、动物的管理和饲养35

二、动物的选择35

五、被试物实验前的毒理学研究35

四、工作人员的安全保护35

(二)每组动物的数目36

(二)处理的剂量水平36

七、慢性诱癌实验36

(四)给予被试物的方式和途径37

(五)实验期间对动物的观察和病理学处理37

(六)实验数据的统计学处理37

(七)总结37

八、慢性动物实验存在的问题及可能的解决方法38

(一)慢性动物实验工作量过于庞大38

第三节 短期筛检试验39

(二)致突变试验39

二、短期试验的分类39

(二)动物实验数据不能外推于人39

一、短期筛检试检的理论依据39

(三)染色体效应试验40

三、配套短期试验的意义40

四、成纽短期试验的最佳设计41

五、寻找能够补充Ames试验的其他短期试验42

(一)在英国的协作研究42

(二)国际的协作研究42

(一)美国国家环境卫生科学研究所的近期报道43

(二)对Tennant等报告的反应43

六、对短期试验效用的怀疑和重新评价43

第四节 培养细胞的转化试验45

一、主要的实验材料与方法45

二、成纤维细胞株(有限细胞株)45

(一)细胞培养46

(二)转化试验46

三、成纤维细胞系(无限细胞系)48

1．所谓肿瘤基因或原瘤基因49

(一)用细咆系的主要操作方法49

(二)使用细胞系做转化试验的优缺点49

第五节 肿瘤化学(物理、激素、生物毒素)病因研究举例50

一、云南锡矿地区肺癌病因研究50

二、上海轮胎行业肺癌高发的病因研究51

(一)发霉食物和食管癌发生的关系52

(二)患区新发现的亚硝胺致癌性的研究52

三、华北高发的食管癌的病因研究52

(三)高发区居民接触或形成亚硝胺的研究53

(四)其他病因因子的研究53

一、判断综合因素的致癌性较难54

第六节 肿瘤化学(物理、激素、生物毒素)病因研究中的一些问题54

(五)小结54

二、在病因线索中选择出关键性因素加以检查也有一定的困难55

三、很难将动物实验结果外推于人，在流行病学资料不足的时候尤为如此56

四、有些常见人类癌症的病因研究得还不够可能同人体代谢特点有关56

第四章 肿瘤病毒病因的实验研究59

第一节 病毒致瘤作用的研究简史59

第二节 研究方法问题62

一、肿瘤细胞的培养62

二、肿瘤病毒的激活63

三、应用电镜技术检查病毒64

(二)负染色64

(一)超薄切片64

(三)排除假象问题65

(一)铁蛋白标记抗体65

四、应用免疫电镜技术检测病毒抗原65

五、应用核酸分子杂交技术检测病毒基因组66

(二)过氧化物酶标记抗体66

第三节 培养细胞的转化68

一、化学因素诱发细胞转化68

(一)大鼠气管亡皮细胞(RTE细胞)69

(二)大鼠食管亡皮细胞(REE细胞)70

(三)人类表皮形成角质细胞72

二、肿瘤病毒诱发细胞转化73

(一)转化的条件73

(二)转化状惑的固着和逆转74

(三)生长因子与转化75

三、转化细胞的特性77

(一)细胞表面的变化78

(二)生化代谢的变化79

第四节 RNA肿瘤病毒83

一、RNA肿瘤病毒的分布和分类83

(二)慢病毒亚科84

(二)B型病毒84

(三)致瘤病毒亚科84

(一)A型病毒84

二、致瘤性RNA病毒的超微结构84

(一)泡沫病毒亚科84

(四)D型病毒85

(三)C型病毒85

三、RNA肿瘤病毒的生物化学特性86

(一)理化组成86

(二)核酸86

(三)蛋白质86

(四)酶类86

四、RNA肿瘤病毒的抗原性87

(一)型特异性抗原或亚组特异性抗原87

(二)组特异性抗原(gs抗原)87

(五)脂类和碳水化合物87

(三)种群抗原88

五、RNA肿瘤病毒的基因组结构和功能88

六、RNA肿瘤病毒的复制89

(二)外源性病毒90

(一)内源性病毒90

七、RNAB中瘤病毒的生物学分类和其作用特点90

八、RNA肿瘤病毒与动物肿瘤92

(一)RNA肿瘤病毒与动物白血病92

(二)RNA肿瘤病毒与动物肉瘤96

(三)RNA肿瘤病毒与小鼠乳腺癌98

九、RNA肿瘤病毒与人类T细胞白血病99

(一)人类丁细胞白血病与其病毒的分离99

(二)HTLV-Ⅰ型病毒的血清流行病学调查100

(三)HTLV-Ⅰ型病毒对培养细胞的感染和转化作用100

第五节 DNA肿瘤病毒103

一、DNA肿瘤病毒的分类103

二、DNA肿瘤病毒的一般特性104

(一)多瘤病毒科的一般生物学特性104

三、多瘤病毒科104

(二)多瘤病毒科的基因组结构105

(三)多瘤病毒科病毒基因组的编码产物及其功能106

四、乳头状瘤病毒科107

五、腺病毒科108

(一)腺病毒的一般生物学特性108

(二)腺病毒的超微结构和致瘤能力109

(三)腺病毒的基因组编码产物及其功能109

六、疱疹病毒科110

(二)疱疹病毒的结构110

(一)疱疹病毒的一般生物学特性110

(三)疱疹病毒的基因组和其功能111

七、乙型肝炎样病毒科112

八、DNAB中瘤病毒引起细胞转化的机理112

九、动物肿瘤与DNA肿瘤病毒113

(一)蛙肾腺癌与Lucke 病毒113

(二)Marek病与Marek疱疹病毒113

(五)猴淋巴瘤与疱疹病毒114

(三)多型肿瘤与多瘤病毒114

(四)兔淋巴瘤与疱疹病毒114

(一)Burkilt淋巴瘤和鼻咽癌与EB病毒115

十、人类肿瘤与DNA肿瘤病毒115

(二)原发性肝癌与乙型肝炎病毒117

(三)子宫颈癌与乳头状瘤病毒119

第五章 肿瘤发病学研究123

第一节 正常细胞恶性变机理的学说123

一、基因改变引起恶性变124

(一)主要学说124

(二)主要证据125

(一)去阻遏说127

(二)膜改变致癌说127

(三)转化基因说128

(四)胚胎基因“开关”说129

一、肿瘤的形成过程130

第二节 肿瘤的形成、发展与演进130

(二)总和作用(或累加作用)说131

(二)两阶段学说131

(三)多击 多步说134

二、肿瘤的演进136

第三节 肿瘤细胞的起源、发育和分化137

一、肿瘤细胞的起源与肿瘤异质性138

(一)、肿瘤的单克隆起源与多克隆起源138

(二)肿瘤干细胞138

(三)肿瘤干细胞的起源139

(四)肿瘤的异质性及其起源141

二、肿瘤细胞的分化和其控制143

(一)肿瘤细胞的分化143

(二)肿瘤细胞分化的控制144

4．部份原瘤基因确实与恶性变有关149

3．肿瘤基因与逆转录致瘤病毒的关系149

2．在正常生物体中，原瘤基因并不是静止和不表达的基因149

第一节 肿瘤基因和抗瘤基因的概念及意义149

第六章 肿瘤基因和抗瘤基因149

一、肿瘤基因与抗瘤基因错误的命名和概念149

(二)原瘤基因等为生命所必需150

(五)恶性变和致瘤基因的关系150

(四)原瘤基因的异常激活150

三、肿瘤基因对恶性变机理研究的贡献150

(一)原瘤基因和抗瘤基因属看家基因150

二、肿瘤基因、原瘤基因和抗瘤基因的概念150

6．肿瘤基因或原瘤基因的命名很不确切150

5．当前普遍认为原瘤基因的产物与细胞生长有关150

(三)原瘤基因和病毒基因的关系151

(一)70年代的两种恶性变学说151

(二)病毒和化学致癌151

(三)细胞遗传学151

(四)生长因子及受体151

(五)膜生物化学及第二信使系统的研究151

第二节 肿瘤基因及其产物的分类151

一、蛋白质磷酸化激酶类151

二、生长因子及生长因子受体153

三、ras族——膜信号传递蛋白153

四、核蛋白——分裂信号效应蛋白153

(二)从染色体易位结合分子克降技术来确定激活的肿瘤基因154

(一)应用DNA转染技术分离和定位肿瘤基因154

(三)从基因的异常表达来确定激活的肿瘤基因154

第三节 人类肿瘤的肿瘤基因154

五、其它154

一、从人体肿瘤中证实的肿瘤基因154

二、人原瘤基因在染色体的定位156

第四节 肿瘤基因的激活机理156

一、DNA重排156

(一)促进子的插入156

(二)负调控区的失活或丢失156

二、基因放大157

三、点突变157

(一)ras基因点突变的意义157

(二)细胞转化中ras基因等的点突变可能是选择的结果157

四、其它调控的异常157

一、单个肿瘤基因的作用158

二、两类肿瘤基因的协同作用158

(二)转录后的调控异常158

第五节 肿瘤基因的协同作用158

(一)反式(trans)调控系统158

三、人体细胞系统肿瘤基因的作用159

1．可能尚需其他肿瘤其因的参与159

2．可能尚需抗瘤基因的火活或丢失159

3．可能尚需细胞内基因组遗传稳定性受破坏159

第六节 肿瘤基因研究的几个重要方面159

一、肿瘤基因与分化的关系159

二、肿瘤基因与化学致癌159

三、肿瘤基因激活与多阶段恶性变学说的关系160

四、肿瘤基因与肿瘤的演进160

(三)抗肿瘤基因的性质和生物学意义161

(二)正常和恶性细胞杂交中正常细胞染色体对恶性行为的抑制161

(一)遗传性肿瘤中某些基因的丢失161

二、抗肿瘤基因的实验证据161

一、抗肿瘤基因的概念161

第七节 抗肿瘤基因161

第八节 人原发性肝癌的肿瘤基因研究162

一、人原发性肝癌中的Nfas162

1．通过DNA转染证明N ras为人肝癌的转化基因162

2．肝癌中N-ras的过量表达163

3．肝癌中N-Fas的重排与放大163

二、人原发性肝癌中其它激活的肿瘤基因163

(一)C-myc的过量表达与基因放大163

1．HBV DNA整合164

四、HBV与人原发性肝癌164

3．它们可能参与肿瘤侵袭过程164

2．C-myc、ets2及IGFⅡ的可能作用164

1．N-ras的可能作用164

三、N-ras、C-myc、ets2及IGFⅡ在肝癌癌变小的可能作用164

(三)IGFⅡ的过量表达164

(二)etS_2的过量表达164

2．人肝癌中存在游离复制型的HBV DNA165

3．HBV感染与细胞遗传稳定性166

五、病毒与化学致癌剂引起人肝癌癌变的两种可能模式166

1．子宫内HBV感染167

2．个体发育过程中先接触化学致癌剂后感染HBV167

第九节 评论168

一、对癌基因与抗癌基因的评论168

1．癌基因与抗癌基因的相对意义168

(一)传统的研究技术路线169

二、对癌基因研究的战略及具体技术的评论169

3．肿瘤是一种异常生长169

2．促进和抑制生长物质的双重性169

(二)新的战略的探索171

第十节 结语和展望172

1．概念上的突破172

2．技术上的突破172

第七章 肿瘤细胞特征及其行为176

第一节 肿瘤的超微结构特征及意义176

一、肿瘤细胞的超微结构特征176

(一)肿瘤细胞核的改变176

(二)肿瘤细胞质的改变177

(三)肿瘤细胞表面和细胞连接180

(二)癌瘤与肉瘤的区别181

(一)肿瘤的良恶性181

二、肿瘤细胞超微结构的意义181

(三)鳞状细胞癌与腺癌的区别182

(四)肿瘤病因学和组织发生学183

第一节 恶性细胞的染色体184

一、肿瘤染色体标本的制备184

二、染色体显带及其在恶性细胞染色体研究的应用186

三、恶性细胞染色体分析的方法187

(一)恶性细胞染色体数目的分析187

(二)恶性细胞染色体结构的分析187

(三)肿瘤异常染色体和核型的表达方式188

四、恶性肿瘤的非随机性染色体变化188

(一)人类白血病的非随机性染色体异常188

(三)肿瘤患者的体质性染色体变化189

(二)人类实体瘤的非随机染色体异常189

(四)实验动物恶性肿瘤的染色体变化190

五、染色体畸变在肿瘤发生中的意义191

(一)小鼠与人类体细胞杂交191

(二)肿瘤基因的定位与肿瘤染色体断裂点的一致性191

一、侵袭性的概念191

(三)染色体易位与肿瘤基因的激活192

(四)肿瘤患者染色体脆性部位192

(五)染色体上HSR和DM是基因扩增在亚细胞水平上的表现192

第三节 肿瘤细胞侵袭性的研究194

二、侵袭性研究的方法和途径194

三、恶性细胞侵袭过程形态学特征的研究195

(一)侵袭性细胞本身的功能196

四、有关恶性细胞侵袭诸因素的研究196

(二)宿主在侵袭过程的积极作用199

五、研究中仍待解决的问题200

第四节 肿瘤细胞转移性的研究201

一、研究转移的实验动物模型203

(一)同族或同基因型动物体内的移植瘤模型203

(二)免疫缺陷动物体内的人类肿瘤异种移植转移模型205

(三)体内和体外结合的转移性癌细胞筛选系统205

二、宿主的免疫防御对肿瘤转移影响的实验研究207

1．自然杀伤细胞207

2．淋巴因子激活杀伤细胞208

三、转移性恶性细胞DNA特性的研究208

(一)DNA甲基化是真核基因表达中的调节信号211

一、DNA甲基化与细胞恶性变的关系211

第一节 DNA与肿瘤的发生211

第八章 肿瘤的若干生化问题211

(二)DNA甲基化与恶性肿瘤发生有密切关系212

二、DNA修复机理的缺损与肿瘤发生214

(一)DNA序列是高度精确和稳定的214

(二)致癌剂与DNA大分子的结合215

(三)损伤DNA的修复-ADP-核糖基转化酶系统217

三、DNA插入、重组、扩增与肿瘤发生218

(一)DNA在生物演化过程中呈多型性218

(二)DNA交换、易位和重组与肿瘤发生218

四、线粒体DNA与肿瘤220

第二节 肿瘤的生化特点220

一、肿瘤细胞生长失控的分子基础及其与肿瘤基因表达的关系222

二、肿瘤细胞表面大分子及其生物学意义224

(一)转化细胞及肿瘤细胞表面复合糖的改变225

(二)肿瘤细胞表面分子与转移潜能229

(三)肿瘤细胞表面成分的脱落及其临床意义233

(四)细胞表面成分的研究方法233

三、肿瘤细胞的代谢235

(一)核酸代谢的变化235

(二)蛋白质代谢的变化235

(三)酶的改变237

(四)糖代谢的改变与宿主的恶病质238

(五)异位激素的分泌239

第九章 肿瘤和宿主相互关系244

第一节 肿瘤免疫244

一、导言和研究简史244

二、肿瘤抗原及其免疫原性244

(一)肿瘤相关移植抗原245

(二)肿瘤共同抗原246

(三)癌胚抗原或逆行性抗原247

三、抗肿瘤细胞的免疫反应247

(一)T淋巴细胞的反应247

(二)天然免疫细胞的反应251

(三)B淋巴细胞反应260

四、免疫监管260

(一)免疫逃逸261

(二)肿瘤特异抗原的诱导261

3．BRMs的基本目标262

5．生物反应调整战略和进展262

4．BRMs战略是以现代分子生物学和肿瘤免疫生物学为理论基础而设计的新战略262

2．BRMs制剂的分类262

1．什么是BRMs战略262

五、应用生物反应调整战略治疗肿瘤262

6．前景和问题263

六、抗肿瘤单克隆抗体264

(一)单克隆抗体的产生264

(二)单克隆抗体的应用265

(三)存在问题和解决方法267

第二节 肿瘤间质268

二、肿瘤的血管270

(一)实体瘤的发展过程271

(二)肿瘤血管形成过程的研究271

(三)肿瘤血管形成因子的发现和本质271

(四)肿瘤血管形成因子导致血管形成的机理和过程272

(八)肿瘤血管形成的意义273

(七)肿瘤对血管形成的反应273

(五)移植肿瘤中影响血管形成的因素273

(六)其它影响肿瘤血管形成的因子273

三、肿瘤间质中的细胞成分274

第十章 肿瘤的实验治疗277

第一节 实验治疗在肿瘤治疗研究中的地位277

一、肿瘤实验治疗模型筹建的初期阶段277

二、肿瘤实验治疗地位的日益提高277

三、临床化疗与基础实验研究加强联系278

第二节 主要的实验手段278

一、实验治疗方法的种类及其基本原理和应用前景279

(一)体外筛选方法279

(二)体内筛选方法287

二、实验材料的选择289

(一)实验动物的选择290

(二)实验肿瘤的选择291

三、实验方法的选择294

(一)体外培养瘤细胞的细胞毒检测法294

(二)体内移植瘤疗效的检测法296

(三)附加免疫学检测指标筛选通过宿主介导的抗癌药301

四、实验结果的评价304

第三节 肿瘤实验治疗面临的挑战及其对策306

一、提高实验模型的专一性，寻找高发常见肿瘤的治疗药306

二、降低抗癌药限制性毒性；增进宿主防御抵抗能力307

三、针对耐药性的措施308

四、寻找针对乏氧细胞及各类瘤细胞不均一亚群的新药310

五、寻找抗转移药物311