《2000年全球消灭脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒检验手册》

1 脊髓灰质炎1

1.1 病毒1

1.2 疾病与发病机理1

1.3 感染的传播方式2

1.4 免疫2

1.5 接种疫苗的预防作用3

2 根据本国消灭脊髓灰质炎所处阶段应用本手册；实验室网络5

2.1 消灭脊髓灰质炎的几个阶段5

2.2 病毒学技术应用指南6

2.3 实验室及其职能7

3 标本的收集、贮存和运输9

3.1 标本的收集9

3.1.1 用于病毒分离的标本10

3.1.2 用于血清学研究的血液标本10

3.1.3 标本的标签11

3.1.4 实验报告表11

3.2 标本的保存和运输11

3.2.1 温度11

3.2.2 运输器材15

3.2.3 航空运输17

4 脊髓灰质炎病毒的分离和鉴定19

4.1 脊髓灰质炎病毒的分离19

4.1.1 标本的准备19

4.1.2 推荐用于分离脊髓灰质炎病毒的传代细胞株20

4.1.3 脊髓灰质炎病毒的分离20

4.1.4 从环境标本中分离脊髓灰质炎病毒21

4.1.5 从混有其它肠道病毒的标本中分离脊髓灰质炎病毒22

4.1.6 脊髓灰质炎病毒的滴定23

4.2 脊髓灰质炎病毒分离株的鉴定26

4.2.1 血清抗体26

4.2.2 用微量板法鉴定26

4.2.3 用试管法鉴定28

5 脊髓灰质炎病毒株的型内鉴别30

5.1 单克隆抗体用于脊髓灰质炎病毒株的型内鉴别30

5.2 核酸探针杂交法用于脊髓灰质炎病毒分离物的型内鉴别33

5.2.1 标本的甲醛处理35

5.2.2 将脊髓灰质炎病毒RNA固定到硝基纤维膜上35

5.2.3 杂交36

5.2.4 清洗硝基纤维膜以除去未结合的探针37

5.2.5 杂交物的检测37

5.2.6 试剂38

6 脊髓灰质炎病毒中和抗体的检测40

6.1 对脊髓灰质炎病毒免疫力的血清学监测40

6.1.1 实验所用材料41

6.1.2 微量中和试验的步骤41

7 细胞培养技术及其在脊髓灰质炎实验室诊断中的应用46

7.1 细胞培养的基本条件46

7.2 细胞培养系统的选择46

7.3 细胞培养47

7.4 细胞的贮存50

7.5 建立细胞库54

8 实验室的生物安全性56

8.1 感染危险的由来56

8.2 带有危险性的操作步骤57

8.3 减少感染危险的方法57

8.4 污染物的处理58

附录59

附录1 快速评价3剂三价口服脊髓灰质炎活疫苗(OPV)剂量与血清学反应关系的操作规程59

附录2 培养病毒和细胞的培养液及有关试剂的成分61

附录3 RD和HEp-2传代细胞的来源64

附录4 病毒母液的制备67

缩略语68