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第一章 液相色谱法的基本原理1

第一节 引言1

第二节 色谱法的分类1

一、按定相和动相的物态分类2

二、按实验技术分类2

三、按分离的机制分类2

(一)吸附色谱2

(二)分配色谱2

(三)离子交换色谱2

(四)凝胶过滤色谱3

(五)其它3

四、按洗脱方式分类3

(一)洗脱3

(二)迎头分析4

(三)置换4

第三节 色谱法分离的过程4

第四节 色谱柱及色谱图的重要参数5

一、色谱柱参数5

二、色谱图参数5

第五节 液相色谱的基本理论6

一、分布常数和质量分布比6

二、总保留体积与分布常数的关系7

三、理论塔板和理论塔板高度7

四、分辨率8

五、分辨率的另一表示方法8

六、柱效率9

(一)涡流扩散9

(二)分子扩散10

(三)传质10

(四)动相流速11

(五)定相颗粒大小11

第六节 洗脱峰不对称及其原因11

一、吸附等温线的类型11

二、样品量对色谱峰的影响11

第七节 多组份的分离12

一、洗脱的一般问题12

二、有限峰容量问题14

附录14

参考文献16

第二章 离子交换树脂色谱法17

第一节 引言17

第二节 离子交换树脂17

一、强酸性阳离子交换树脂18

二、强碱性阴离子交换树脂18

三、弱酸性阳离子交换树脂19

四、弱碱性阴离子交换树脂19

第三节 离子交换树脂色谱法的基本原理25

第四节 离子交换树脂色谱技术26

一、树脂的选择26

(一)树脂的类型27

(二)交联度27

(三)粒度和形状27

(四)比重28

(五)交换量28

(六)稳定性28

二、树脂的处理、再生与转型28

三、离子交换柱的选择30

四、装柱30

五、洗脱与收集30

第五节 离子交换树脂基本性能的测定31

一、粒度的测定31

二、含水量的测定31

三、湿真比重的测定32

四、交换容量的测定32

第六节 离子交换树脂在生产和科学研究中的应用实例34

一、碱性氨基酸的分离制备34

二、谷氨酸的分离制备37

三、单核苷酸的分离制备41

参考文献41

第三章 离子交换纤维素色谱法42

第一节 离子交换纤维素的种类42

第二节 基本原理44

第三节 色谱分离条件的选择45

一、离子交换纤维的素的选择45

(一)类别的选择45

(二)颗粒大小的选择45

二、缓冲液的选择45

第四节 操作步骤47

一、柱色谱装置47

二、离子交换纤维素的处理48

(一)过筛48

(二)酸、碱处理48

(三)平衡48

(四)再生48

(五)其它48

三、装柱49

四、加样49

五、洗脱50

(一)阶段洗脱50

(二)梯度洗脱50

六、流速及其控制53

七、洗脱液分析53

八、洗脱峰纯度鉴定54

九、脱盐和浓缩54

第五节 应用实例54

一、NADP甘露脱氢酶的分离纯化54

二、人血清免疫球蛋白的分离56

三、免Υ球蛋白的木瓜蛋白酶水解物的分离56

附录：离子交换交联葡聚糖和特种离子交换剂56

一、离子交换交联葡聚糖56

二、特种离子交换剂58

三、应用实例58

参考文献60

第四章 凝胶过滤色谱法61

第一节 引言61

第二节 分子筛原理61

一、分子筛的基本原理61

二、几个名词的含义63

三、分子筛分配系数与分子量的关系63

第三节 凝胶66

一、交联葡聚糖66

二、聚丙烯酰胺凝胶68

三、琼脂糖69

第四节 实验操作70

一、柱70

二、装柱71

三、上柱、洗脱与收集72

四、样品洗脱峰的检测74

第五节 分子量的测定75

一、外水体积与内水体积的测定76

二、kd对IgM的标准线的测定77

三、方法的局限性80

第六节 生物高分子的分离纯化80

一、凝胶的选择80

二、柱的选用81

三、洗脱条件82

第七节 脱盐82

一、脱盐用的凝胶82

二、柱的尺寸83

第八节 蛋白质解离缔合体系的研究方法83

一、慢缔合体系84

二、快缔合体系84

第五章 纸色谱法87

第一节 基本原理87

第二节 影响Rf值的主要因素90

一、样品本身的性质90

二、溶剂的性质92

三、pH92

四、展层温度92

五、滤纸的性质93

第三节 实验方法95

一、滤纸的选择95

二、溶剂的选择95

三、样品的制备及加样95

四、展层方式96

五、色谱的检出97

(一)化学方法97

(二)物理方法98

(三)微生物法98

(四)放射性法98

六、定性检定Rf值的测定99

七、定量方法100

(一)洗脱比色法100

(二)斑点面积法100

第四节 应用101

一、多肽及蛋白质的氨基酸分析101

(一)样品处理101

(二)点样量102

(三)展层102

(四)显色：定性检定103

(五)定量测定109

二、糖类的分析110

(一)单糖和二糖110

(二)低聚糖和多糖113

三、脂族酸的分析114

(一)挥发性脂族酸114

(二)非挥发性的水溶性脂族酸115

(三)α-酮酸117

四、核酸降解物(核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基)的分析119

(一)样品制备119

(二)色谱分离119

(三)显色：定性检定121

(四)定量测定122

五、抗生素、磺胺类和维生素类的分析123

(一)青霉素、链霉素等的分析123

(二)碘胺类的分析124

(三)维生素类的分析125

六、有关氨基酸、糖类、脂族酸、嘌呤、嘧啶以及维生素等的其它显色试剂和显色方法127

(一)氨基酸127

(二)糖类129

(三)脂族酸131

(四)嘌呤、嘧啶等131

(五)维生素132

参考文献133

第六章 薄层色谱法134

第一节 引言134

第二节 薄层色谱法的基本原理及其类型135

第三节 吸附剂的选择和处理136

一、吸附剂的性能136

二、吸附剂的处理137

(一)硅胶137

(二)氧化铝138

(三)纤维素138

(四)葡聚糖141

(五)聚酰胺141

第四节 薄层色谱操作技术143

一、薄板的制备143

(一)薄板的制备143

(二)涂布法144

(三)烧结玻璃板法144

二、点样146

三、展层147

(一)展层剂的选择147

(二)展层装置149

(三)展层操作方法151

四、显色和被检物的检定152

(一)显色152

(二)喷雾法153

(三)Rf值153

五、薄层色谱图的分析154

第五节 薄层色谱的定量分析155

一、洗脱后测定法155

(一)重量法156

(二)分光光度法156

(三)荧光法158

二、板上测定法158

第六节 薄层色谱法的应用159

一、氨基酸和肽及基衍生物的分离160

二、核酸及核酸类物质的分离163

三、糖类物质的分离165

四、类脂物质的分离167

五、激素物质的分离170

附录：氨基酸、核苷酸、糖类、脂类和激素薄层色谱参数173

参考文献184