《分子生物学研究方法》

目 录1

第一章分子遗传学基础1

第一节分子生物学与分子遗传学发展简介1

第二节DNA的组成及其特性2

第三节基因的分子结构与功能7

第四节DNA突变与疾病14

第二章 细菌质粒DNA的提取与纯化及其应用19

第一节质粒的特性及应用19

第二节质粒DNA的分离21

第三节细菌质粒DNA大量提取与纯化23

第四节快速、小量提取质粒DNA36

第三章染色体DNA酶切图谱分析45

第一节染色体DNA提取与纯化45

第二节DNA提取纯化注意事项52

第三节限制性内切酶及其应用56

第四节酶解反应58

第五节内切酶使用中的注意事项62

第六节影响限制性内切酶作用的因素63

第七节染色体DNA酶切图谱的制备及其应用64

第四章分子杂交技术69

第一节DNA分子杂交的基本原理69

第二节核酸分子杂交的过程、类型和种类71

第三节分子杂交技术操作74

第四节影响标记效果的因素及注意事项80

第五节非放射性同位素的标记系统84

第六节DNA分子杂交87

第七节影响杂交反应的主要因素92

第五章 目的DNA的体外重组与克隆96

第一节带有目的基因DNA片断的获得96

第二节 目的基因与载体DNA的体外重组101

第三节细菌质粒的转化109

第四节重组质粒的鉴定113

第六章 PCR检测技术117

第一节PCR的基本原理117

第二节待扩增样品的制备118

第三节PCR操作方法124

第四节PCR产物的分析126

第五节PCR反应条件的优化129

第六节PCR污染对策135

第七章 DNA序列分析141

第一节DNA序列分析方法141

第二节双脱氧链终止法143

第八章凝胶电泳技术154

第一节琼脂糖凝胶电泳技术154

第二节琼脂糖凝胶中DNA的回收159

第三节聚丙烯酰胺凝胶电泳165

第四节单链及短双链DNA分离171

第五节脉冲电场梯度电泳174

第六节腹泻标本中病毒RNA或DNA的提取178

第九章单克隆抗体技术、耐药性质粒接合181

转移实验及细菌质粒消除实验181

第一节单克隆抗体技术181

第二节耐药性质粒接合转移试验186

第三节细菌质粒消除实验190

第十章常用的生化技术与溶液配制192

第一节玻璃器皿、塑料器皿及透析袋的处理192

第二节有机试剂和抗生素的配制193

第三节缓冲液和贮存液配制196

第四节几种酶的处理201

第五节DNA和RNA的定量、纯化与浓缩203

参考文献209