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第一章概论1

第一节 细胞因子的概念5

一、细胞因子的共同特点5

二、细胞因子的分类8

三、细胞因子的临床应用9

第二节 细胞因子受体13

一、细胞膜受体13

二、可溶性受体16

第三节 细胞因子的研究方法18

第二章细胞因子的免疫测定法20

第一节 应用免疫检测法的注意事项21

一、免疫检测法与生物学活性检测法的比较21

二、标准品的应用21

三、影响检测结果的因素22

四、固相的包被和洗涤23

五、细胞因子和抗细胞因子抗体的标记24

第二节 放射免疫测定25

一、标记细胞因子的碘原法26

二、放射免疫测定法（竞争抑制实验）27

第三节 免疫放射测定法28

一、抗细胞因子lgG的纯化29

二、放射标记lgG的氯胺T法29

三、免疫放射测定法30

第四节 酶联免疫吸附试验31

一、双抗体夹心法32

二、竞争抑制法35

三、同源ELISA36

四、标记抗体的方法37

第五节 时间分辨荧光免疫检测法40

第六节 免疫沉淀法和Western印迹实验42

二、免疫沉淀43

一、抗原制备43

三、SDS-PAGE电冰44

四、Western印迹实验48

第三章研究细胞因子调节细胞生长活性的方法53

第一节 研究细胞因子调节细胞生长活性方法的要点53

一、用于检测细胞因子的细胞株53

二、测定细胞数的方法58

三、细胞因子的标准品59

四、关于待测样品61

五、待测细胞因子和细胞因子标准品的系列稀释62

六、结果的表达方式62

第二节 细胞因子调节细胞生长活性的检测法62

一、细胞株的培养、冻存和复苏63

二、[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数64

三、MTT检测法65

四、XTT检测法67

五、MTS检测法68

六、NAG检测法70

七、Alamar BlueTM摄入法70

八、碱性磷酸酶检测法（AKP法）71

九、三磷酸腺苷检测法（ATP法）72

十、染料染色法测定细胞数73

十一、直接计数细胞75

第三节 细胞因子活性单位的计算76

一、直接作图法77

二、概率单位分析法78

第四节 研究细胞增殖的其它方法79

一、关于[3H]脱氧胸苷摄入法79

二、标记细胞核的放射自显影术80

三、用荧光细胞计数仪检测细胞数81

四、有丝分裂指数分析82

第五节 集落形成实验83

一、分离骨髓细胞84

二、集落形成试验86

第四章细胞因子介导细胞毒活性的研究方法92

第一节 细胞因子溶细胞和抑制细胞生长作用的检测法92

第二节 细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法93

一、CMC中效应细胞的制备94

二、靶细胞的制备（分离肿瘤细胞和TIL）98

三、4小时51Cr释放法检测CMC活性99

四、[3H]脱氧胸苷释放法102

五、LDH释放法103

六、时间分辨荧光分析法104

七、用MTT检测法测定CMC108

九、单个细胞的CMC试验110

八、荧光法检测CMC110

第三节 细胞凋亡的研究方法111

一、琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞112

二、用荧光激活的细胞分类仪检测凋亡细胞113

第五章细胞因子抗病毒活性的研究方法118

第一节 测定细胞因子抑制细胞病变的活性120

一、微孔板检测法120

二、多孔检测法123

第二节、病毒蚀斑形成实验124

第三节 用抑制病毒产量法测定干扰素125

一、用病毒感染经干扰素处理的细胞125

二、病毒滴度的检测126

三、浓缩病毒保存液的制备127

第六章细胞因子趋化活性的研究方法129

第一节 琼脂糖小滴化学动力学试验129

一、从外周血中分离多核粒细胞129

二、琼脂糖小滴化学动力学试验131

一、琼脂平皿的制备132

第二节 琼脂糖中的趋化实验132

二、琼脂糖中的趋化实验133

第三节 微孔小室中的趋化实验134

一、分离外周血单个核细胞136

二、趋化试验136

三、用显色反应计数趋化的中性粒细胞137

四、IL-16诱导T淋巴细胞趋化实验139

第四节 用β葡萄糖醛酸或过氧化物酶检测趋化因子140

第七章细胞因子和T淋巴细胞142

第一节 T细胞的分离和纯化142

一、用淋巴细胞分离液分离单个核细胞143

二、从单个核细胞中分离T细胞145

第二节 建立抗原特异性T细胞株或T细胞克隆149

一、建立T细胞株149

三、T细胞亚群的分离149

二、用有限稀释法建立T细胞克隆151

第三节 T细胞产生细胞因子的研究153

一、T细胞亚群及其产生的细胞因子153

二、研究T细胞产生的细胞因子的方法156

第四节 细胞因子对T细胞的作用158

一、调节T细胞生长158

二、调节T细胞分化和活性159

三、T细胞与免疫耐受160

第八章细胞因子和B淋巴细胞162

第一节 研究B细胞反应的常用试剂163

第二节 制备和纯化B细胞164

一、制备单个核细胞164

二、用尼龙毛法分离B细胞166

三、从单个核细胞中去除T细胞167

四、用粘附法分离单核细胞168

五、按细胞比重分离B细胞169

六、用单克隆抗体分离B细胞亚群170

七、用于检测BCGF和BCDF的人B细胞株173

第三节 B细胞活化、增殖和分化试验174

一、B细胞活化试验174

二、细胞因子的BCGF活性检测176

三、细胞因子的BCDF活性检测178

四、细胞因子的T细胞取代因子（TRF）活性检测181

第四节 固相酶免疫测定检测人B细胞分泌的免疫球蛋白182

一、测定人B细胞分泌的免疫球蛋白(Ig)182

二、测定IgG的亚类183

三、检测特异性抗体的酶免疫测定法183

第九章细胞因子和单核巨噬细胞185

第一节 单核巨噬细胞的分离和纯化185

一、巨噬细胞的分离186

二、巨噬细胞的纯化189

第二节 活化巨噬细胞的检测192

一、呼吸爆发活性的检测192

二、检测MHC-Ⅱ类分子表达194

三、检测甘露岩藻糖受体196

四、巨噬细胞吞噬功能的检测199

五、检测巨噬细胞分泌的细胞因子201

六、巨噬细胞杀伤肿瘤细胞活性的研究201

第三节 巨噬细胞移动抑制活性的测定203

一、琼脂糖小滴培养法203

二、琼脂糖平皿打孔法205

第十章内皮细胞粘附实验和血小板活化因子207

第一节 内皮细胞的研究方法208

一、内皮细胞的分离和培养208

二、内皮细胞趋化实验210

三、血管内皮细胞的前凝血活性213

四、内皮细胞粘附试验215

第二节 PAF的测定220

一、从EC中提取PAF221

二、鉴定PAF222

三、定量检测PAF的生物活性222

第六节 单克隆抗体的制备225

第十一章细胞内和细胞膜上细胞因子的研究225

第一节 检测单个细胞结合的细胞因子225

一、生物素-抗生物素蛋白技术226

二、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶技术228

三、间接免疫荧光法229

四、酶联免疫过滤法（EIF）233

第二节 检测单个细胞分泌的细胞因子234

一、反相溶血空斑试验234

二、细胞斑点试验238

三、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）239

第三节 检测细胞内的细胞因子243

一、细胞培养和固定243

二、用荧光标记的单克隆抗体染色244

第十二章抗细胞因子抗体的制备和鉴定247

第一节 选择免疫原247

第二节 多肽和载体蛋白的连接249

一、同源双功能交联剂249

二、异源双功能交联剂251

第三节 选择动物252

第四节 佐剂252

第五节 免疫程序253

一、免疫动物253

二、动物采血254

一、与细胞配合有关的因素及溶液配制256

二、杂交瘤的制备方法259

一、抗体的结合能力测定266

第七节 鉴定抗体和测定蛋白含量266

二、抗体的蛋白质含量测定270

第八节 抗体的纯化273

一、IgG的纯化273

二、IgM的纯化276

第十三章细胞因子受体及其信号传导的研究278

第一节 IFN-r与受体结合的研究279

一、干扰素的磷酸化标记279

二、受体结合实验280

三、[32P]Mu-IFN-r共价交联到细胞上282

四、克隆化Mu-IFN-r受体283

第二节 GM-CSF受体的研究284

一、用地高辛标记重组人GM-CSF285

二、受体结合试验285

一、用125I标记的重组IL-2研究IL-2受体287

第三节 用125I标记的IL-2研究IL-2受体287

三、受体-配体交联物的SDS-PAGE分析287

二、IL-2受体分子量的测定289

第四节 可溶性细胞因子受体的测定291

一、可溶性IL-2受体的测定291

二、检测可溶性IL-1受体291

第五节 细胞中受体信号传导的研究292

一、肌醇磷酸的测定294

二、G蛋白和信号传导296

三、磷脂的分析299

四、细胞内钙的测定300

五、测定cAMP302

六、转录调节因子的研究304

第十四章细胞因子的分子生物学研究306

第一节 细胞因子基因的克隆和表达307

一、建立细胞因子cDNA文库307

第二节 细胞因子基因的DNA印迹检测310

二、建立细胞因子基因文库的原则310

一、DNA分离、纯化和限制性酶消化311

二、凝胶电冰和Southern转移314

三、标记探针和Southern杂交318

四、影响结果的因素322

第三节 细胞因子mRNA的 RNA印迹实验325

一、提取和保存RNA时的注意事项325

二、总RNA的提取325

三、RNA的琼脂糖凝胶电泳330

四、Northern转移331

五、探针的制备和纯化332

六、DNA探针与膜上的RNA杂交（Northern杂交）332

第四节 原位杂交334

一、组织或细胞样品的处理334

二、探针的选择和标记336

三、杂交和结果观察338

四、原位杂交研究细胞因子mRNA的实例341

第五节 研究细胞因子mRNA的聚合酶链反应346

一、RNA纯化（微量法）347

二、逆转录349

三、PCR和结果分析349

四、定量PCR352

第六节 细胞因子的基因研究和基因治疗360

一、转基因动物360

二、基因敲除动物360

三、细胞因子的基因治疗362

第十五章白细胞介素及其研究方法367

第一节 白细胞介素1367

一、IL-1的结构特点368

二、IL-1的产生及其调节371

三、IL-1的受体373

四、IL-1的生物学功能374

五、IL-1的诱导和纯化方法377

六、IL-1的检测和研究方法379

七、IL-1的临床应用研究386

第二节 白细胞介素2387

一、IL-2的结构和特点388

二、IL-2的产生和调节389

三、IL-2的受体389

四、IL-2的生物学活性393

五、IL-2的诱导和纯化方法395

六、IL-2的检测和研究方法397

七、IL-2的临床应用和研究403

第三节 白细胞介素3406

一、IL-3的结构和特点406

二、IL-3的产生和调节408

三、IL-3的受体409

四、IL-3的生物学活性411

五、IL-3的诱导和纯化方法413

六、IL-3的检测和研究方法415

七、IL-3的临床应用和研究417

第四节 白细胞介素4418

一、IL-4的结构和特点418

二、IL-4的产生和调节420

三、IL-4的受体420

四、IL-4的生物学活性423

五、IL-4生物活性的检测426

六、IL-4的纯化430

七、IL-4的临床应用研究431

第五节 白细胞介素5432

一、IL-5的结构和特点432

三、IL-5受体434

二、IL-5的产生和调节434

四、IL-5的生物学活性和应用研究*435

五、IL-5的研究方法436

第六节 白细胞介素6443

一、IL-6的结构和特点444

二、IL-6的产生和调节446

三、IL-6的受体447

四、IL-6的生物学活性和应用研究449

五、IL-6的研究方法453

第七节 白细胞介素7458

一、IL-7的结构和特点459

二、IL-7的产生和调节460

三、IL-7受体460

四、IL-7的生物学活性和应用研究462

五、IL-7的研究方法464

第八节 白细胞介素8和趋化因子家族466

一、白细胞介素8467

二、C-X-C趋化因子473

三、C-C趋化因子477

四、C趋化因子和C-X2-C趋化因子479

五、趋化因子受体480

六、趋化因子的生物学活性482

七、趋化因子的临床研究484

八、IL-8和趋化因子的研究方法485

第九节 白细胞介素9487

一、IL-9的结构和特点487

二、IL-9的产生和调节488

三、IL-9受体488

四、IL-9的生物学活性及其应用489

五、IL-9的研究方法490

第十节 白细胞介素10492

一、IL-10的结构和特点493

二、IL-10的产生和调节494

三、IL-10受体495

四、IL-10的体外生物学功能496

五、IL-10的研究方法497

六、IL-10的体内研究和临床研究499

第十一节 白细胞介素11501

一、IL-11的结构和功能502

二、IL-11的产生和调节503

三、IL-11的受体503

四、IL-11的生物学活性和应用研究504

五、IL-11的研究方法505

一、IL-12的结构和特点507

第十二节 白细胞介素12507

二、IL-12的产生和调节509

三、IL-12的受体510

四、IL-12的生物学活性和动物体内研究511

五、IL-12的临床研究514

六、IL-12的研究方法514

第十三节 其它白细胞介素519

一、白细胞介素13519

二、白细胞介素14525

三、白细胞介素15527

四、白细胞介素16530

五、白细胞介素17533

六、白细胞介素18536

第十六章干扰素及其研究方法540

一、IFN-α的结构和特点541

第一节 α干扰素541

二、IFN-α的产生和调节544

三、IFN-α的受体545

四、IFN-α的生物学活性547

五、IFN-α的诱导和纯化552

六、IFN-α的临床应用研究556

第二节 β干扰素561

一、IFN-β的结构和特点562

二、IFN-β的产生和调节563

三、IFN-β的受体563

四、IFN-β的生物学活性564

五、IFN-β的诱导和纯化564

六、IFN-β的临床应用研究568

第三节 γ干扰素569

一、IFN-γ的结构和特点569

二、IFN-γ的产生和调节570

三、IFN-γ的受体571

四、IFN-γ的生物学活性572

五、IFN-γ的诱导和纯化574

六、IFN-γ的临床应用研究576

第四节 干扰素的研究方法577

一、用基因工程技术检测干扰素的方法577

二、用细胞株检测干扰素活性579

三、检测IFN-γ诱导NO的活性581

第十七章肿瘤坏死因子家族及其研究方法584

第一节 肿瘤坏死因子α584

一、TNF-α的结构和特点584

二、TNF-α的产生和调节587

三、TNF-α受体588

四、TNF-α的生物学活性592

六、TNF-α和TNF-β活性的检测方法600

七、TNF-α的临床应用和研究605

第二节 肿瘤坏死因子β和淋巴毒素609

一、TNF-β和LT-β的结构和特点609

二、TNF-β和LT-β的产生和调节611

三、TNF-β受体和LT-β受体612

四、TNF-β的生物学活性和临床应用研究612

五、TNF-β的研究方法613

第三节 TNF超家族和TNFR超家族613

一、TNF超家族614

二、TNFR超家族615

第十八章集落刺激因子及其研究方法619

第一节 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子619

一、GM-CSF 的结构和特点620

二、GM-CSF 的产生和调节621

三、GM-CSF 的受体621

四、GM-CSF 的生物学活性623

五、GM-CSF 的诱导和纯化626

六、用细胞株检测造血生长因子活性627

七、GM-CSF 的临床应用研究628

第二节 粒细胞集落刺激因子633

一、G-CSF 的结构和特点633

二、G-CSF 的产生和调节635

三、G-CSF 的受体636

四、G-CSF 的生物学活性638

五、G-CSF的纯化639

六、G-CSF 的临床应用研究640

第三节 巨噬细胞集落刺激因子644

一、M-CSF的结构和特点644

二、M-CSF的产生和调节646

三、M-CSF的受体647

四、M-CSF的生物学活性649

五、M-CSF的纯化和检测方法651

六、M-CSF的临床应用研究652

第四节 红细胞生成素653

一、EPO 的结构和特点653

二、EPO的产生和调节654

三、EPO的受体654

四、EPO 的生物学活性656

五、EPO的检测和纯化方法657

六、EPO 的临床应用和研究661

第五节 干细胞因子663

一、SCF的结构和特点663

二、SCF的产生和调节664

三、SCF受体665

四、SCF的生物学活性666

五、SCF的检测和纯化667

六、SCF的临床应用研究671

第六节 其它造血生长因子672

一、与血小板生成有关的造血生长因子672

二、与红细胞有关的造血生长因子673

第一节 表皮生长因子675

一、EGF的结构和特点675

第十九章促生长因子及其研究方法675

二、EGF家族和EGF相关蛋白676

三、EGF的产生和调节678

四、EGF的受体678

五、EGF 的生物学活性680

六、EGF的纯化方法683

七、EGF 的检测方法684

第二节 转化生长因子α686

一、TGF-α的结构和特点686

八、EGF 的临床应用686

二、TGF-α的产生和调节687

三、TGF-α的受体688

四、TGF-α的生物学活性和临床应用688

五、TGF-α的研究方法690

第三节 神经生长因子694

一、NGF的结构和特点694

二、NGF的产生和调节696

三、NGF的受体696

四、NGF的生物学活性699

五、NGF的纯化方法700

六、NGF的检测方法702

七、NGF的临床应用研究704

八、其它神经生长因子704

第四节 血小板衍生的生长因子707

一、PDGF的结构和特点707

二、PDGF的产生和调节709

三、PDGF的受体709

四、PDGF的生物学活性711

五、PDGF的纯化方法712

六、PDGF的检测方法713

七、PDGF的临床应用研究714

第五节 成纤维细胞生长因子715

一、FGF的结构和特点716

二、FGF的产生和调节718

三、FGF的受体718

四、FGF的生物学活性719

五、FGF的纯化方法722

六、FGF的检测方法723

七、FGF的临床应用724

第六节 血管内皮细胞生长因子724

一、VEGF的结构和特点725

二、VEGF的产生和调节726

三、VEGF的受体726

四、VEGF 的生物学活性和应用研究727

五、VEGF 的诱导和纯化方法727

六、VEGF 的检测方法729

第七节 肝细胞生长因子730

第二十章其它细胞因子及其研究方法734

第一节 转化生长因子β734

一、TGF-β的结构和特点735

二、TGF-β的产生和调节738

三、TGF-β的受体739

四、TGF-β的生物学活性742

五、TGF-β的纯化方法746

六、TGF-β的检测和研究方法748

七、TGF-β受体的研究方法751

八、TGF-β的临床应用研究754

第二节 白血病抑制因子755

一、LIF的结构和特点755

二、LIF的产生和调节756

三、LIF的受体757

四、LIF的生物学活性758

五、LIF的诱导和纯化方法759

六、LIF的检测方法761

七、LIF的临床应用研究762

第三节 转移因子762

一、从胎盘提取TF763

第四节 其它细胞因子764

一、巨噬细胞移动抑制因子764

二、从脾脏中提取TF764

二、巨噬细胞活化因子765

三、抑瘤素M766

四、双向调节素767

主要参考文献771

附录1氨基酸的英文缩写779

附录2本文中常见的英文及缩写780

附录3常用试剂的配制789

五、TNF-αTNF-α的诱导和纯化方法997