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第1章细胞生理1

1.1一些细胞器的分离1

1.1.1离体叶绿体的制备1

1.1.1.1破碎叶绿体的制备1

1.1.1.2完整叶绿体的制备2

1.1.2质膜微囊泡的分离及纯化技术3

1.1.3液泡膜微囊的制备5

1.1.4过氧化物酶体的分离6

1.1.5乙醛酸循环体的分离8

1.1.6脂质体的分离及制备9

1.2原生质体的分离10

1.3去液泡原生质体的制备13

1.4细胞突变体的诱发、选择和鉴定14

1.4.1用低浓度N－乙基－N－亚硝基脲（ENU）诱变烟草原生质体，筛选抗氯酸盐和硝酸还原酶缺陷突变体14

1.4.2紫外线（UV）诱变烟草叶肉原生质体筛选抗缬氨酸突变体15

1.5细胞生物学研究中的流式细胞技术17

1.5.1测定细胞周期18

1.5.2测定细胞内游离Ca2＋20

1.5.3测定细胞内蛋白质含量21

1.5.4测量同一细胞中的蛋白质和核酸22

第2章植物的离体培养23

2.1胡萝卜体细胞培养23

2.2离体根培养24

2.2.1番茄或紫花苜蓿的离体根尖的培养法24

2.2.2水稻离体根段上的胚胎发生26

2.3茎尖培养和脱毒26

2.3.1菊花生长点培养法（目的：脱病毒）27

2.3.2杜鹃花的芽培养法（目的：丛芽繁殖）28

2.4花器官和叶片的培养29

2.4.1花器官培养29

2.4.2叶片培养30

2.5胚培养30

2.5.1无核葡萄胚培养（液－固两步培养的工作流程）31

2.5.2水稻幼胚培养32

2.6胚乳培养32

2.7薄层细胞培养34

2.8小孢子培养35

2.9悬浮细胞培养37

2.10原生质体培养38

2.10.1水稻原生质体的分离及培养40

2.10.2原生质体存活率、密度及产量的测定41

2.10.3原生质体植板率的测定42

2.11原生质体融合43

2.11.1植物原生质体的PEG融合技术43

2.11.2植物原生质体电融合46

2.11.3碘乙酸－罗丹明原生质体融合筛选体系的建立及杂交后代的鉴定47

2.12植物的无性快繁技术49

2.12.1由叶组织诱导不定芽——非洲紫罗兰的快速繁殖51

2.12.2由腋芽诱导丛生芽——薄荷的快速繁殖52

2.12.3甘蓝下胚轴通过愈伤组织培养再诱导产生不定芽52

2.12.4 日本茄F1离体快速繁殖53

2.13离体培养条件下的花芽分化54

第3章水分生理和矿质营养55

3.1水势的测定55

3.1.1压力室法55

3.1.2热电偶湿度计法56

3.2水分利用效率（WUE）的测定58

3.2.1单叶水分利用效率58

3.2.2个体或群体水分利用效率59

3.2.2.1盆栽法59

3.2.2.2碳同位素辨别率法59

3.3蒸腾速率的测定60

3.3.1气孔蒸腾的测定60

3.3.2角质层蒸腾的测定63

3.3.2.1用稳态气孔计测算角质层蒸腾63

3.3.2.2离体叶片连续称重同步测定气孔和角质层蒸腾64

3.4植物根系对离子的吸收和运输66

3.4.1液泡膜H＋-ATPase活性的测定66

3.4.2质膜H＋-ATPase活性的测定67

3.4.3测定植物全细胞跨膜钾离子流的膜片钳技术（以蚕豆保卫细胞原生质体为例）68

3.4.4用平面脂双层技术测定离子通道活性71

3.5植物的溶液培养及缺元素培养74

3.6水孔蛋白的检测78

3.6.1水渗透性检测法78

3.6.2水扩散透性检测法80

第4章光合作用83

4.1叶片光合速率的测定83

4.1.1气流法测定叶片的光合速率83

4.1.2氧电极法测定叶片的光合作用放氧86

4.1.3改进干重法测定光合作用速率87

4.2叶片表观光合量子效率的测定89

4.3光呼吸的测定91

4.3.1叶片光呼吸的测定91

4.3.2乙醇酸氧化酶活性的测定92

4.4二氧化碳补偿点的测定93

4.5光合作用中有关色素的测定95

4.5.1叶绿素测定95

4.5.2 β－胡萝卜素测定96

4.5.3植物叶片中δ－氨基乙酰丙酸的测定97

4.6光系统Ⅱ反应中心的提取及测定98

4.6.1光系统Ⅱ颗粒的制备98

4.6.2光系统Ⅱ反应中心复合物的制备99

4.6.3缺失不同外周多肽的光系统Ⅱ颗粒的制备100

4.6.4原子吸收光谱测定光系统Ⅱ中Mn的含量101

4.6.5光系统Ⅱ中EPR信号Ⅱ的测定101

4.7紫细菌光合反应中心的提纯102

4.8叶绿体膜上Mg2＋-ATPase活性的测定104

4.9叶绿体偶联因子（CF1）提取、纯化及ATPase活性测定104

4.10叶绿体光合磷酸化活力的测定（32pi标记法）106

4.11叶绿体Hill反应活力的测定108

4.12叶绿素荧光和延迟荧光的测定与分析109

4.13生物发光法测定植物组织中的腺苷酸含量111

4.14二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Rubisco）羧化活性的测定113

4.15二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Rubisco）加氧活性的测定115

第5章呼吸及碳水化合物代谢117

5.1呼吸速率的测定117

5.2磷酸化酶活性的测定117

5.3磷酸果糖激酶活性的测定118

5.4果糖－1，6－二磷酸酯酶活性的测定119

5.5磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的测定120

5.6焦磷酸：果糖－6－磷酸－1－磷酸转移酶活性的测定121

5.7丙酮酸激酶活性的测定122

5.8α－和β－淀粉酶活性的测定123

5.9淀粉合成酶、ADPG焦磷酸化酶和UDPG焦磷酸化酶活性的测定124

5.10蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶活性的测定126

5.11植物材料中可溶性糖的测定127

5.12β-1，3－葡聚糖酶活性的测定128

5.13几丁酶活性的测定129

5.14几种糖苷酶活性的测定130

5.15淀粉的测定131

5.15.1总淀粉量的测定131

5.15.2直链淀粉和支链淀粉的测定131

第6章氮代谢133

6.1总氮量的测定——微量凯氏（Kjeldahl）定氮法133

6.1.1蛋白质氮的测定134

6.1.2非蛋白质氮的测定134

6.2非蛋白质氮的组分分析135

6.2.1氨基氮的测定135

6.2.2羧基的测定136

6.2.3酰胺氮（谷酰胺、天冬酰胺和酰胺总量）的测定137

6.3氨态氮的测定138

6.4硝态或硝酸态氮的测定139

6.5尿素含量的测定140

6.6蛋白质的提取和测定141

6.6.1蛋白质组分的分析143

6.6.2蛋白质分子量的测定144

6.6.3蛋白质等电点的测定146

6.6.4蛋白质中氨基酸组分的分析147

6.6.5赖氨酸含量的测定148

6.6.6谷胱甘酞含量的测定149

6.7蛋白酶（肽酶）活性的测定149

6.8脲酶的提取和活性测定151

6.9硝酸还原酶的提取和活性测定152

6.10转氨酶（GOT和GPT）的提取和活性测定154

6.11谷氨酸脱氢酶的提取和活性测定156

6.12谷酰胺合成酶的提取和活性测定157

6.13天冬酰胺酶的提取和活性测定158

6.14酪氨酸酶的提取和活性测定159

6.15色氨酸合成酶的提取和活性测定160

6.16色氨酸转氨酶和色氨酸脱羧酶的提取和活性测定161

6.17谷氨酸脱羧酶的提取和活性测定162

6.18根瘤菌的结瘤能力和根瘤固氮活性的测定164

6.19豆科植物固氮中能量利用的相对效率测定165

6.20根瘤菌和植物组织培养之间固氮联合体的建立方法165

6.21植物体内固氮内生菌的分离和鉴定167

6.22根瘤菌类菌体的制备168

6.23豆血红蛋白的提取与纯化169

6.24豆科植物与根瘤菌共生中凝集素和脂多糖的分离和纯化169

6.25蓝藻异型细胞的分离171

6.26生物固氮研究中常用的测定固氮活性的方法171

6.26.1 15N示踪法172

6.26.2微量氨扩散法173

6.26.3乙炔还原法174

6.26.4酰脲含量的测定175

6.27固氮酶的两个组分蛋白的分离和纯化176

6.28钼铁蛋白中铁钼辅因子（FeMCo）的分离177

6.29离体固氮酶固氮活性的测定178

6.30固氮酶的需还原剂ATP水解和需ATP放氢的测定179

6.31氢酶活性的测定180

6.32固氮微生物遗传学研究中的突变体分离181

6.32.1根瘤菌共生（sym）突变体的分离182

6.32.2固氮菌nif突变体的分离183

第7章脂类代谢184

7.1粗脂肪的提取和测定184

7.2植物的脂肪酸组分分析185

7.2.1植物油中不饱和脂肪酸的测定185

7.2.2不饱和脂肪酸结构的分析187

7.2.3芥酸的测定188

7.2.3.1气相色谱法188

7.2.3.2混浊法188

7.2.4γ－亚麻酸含量测定188

7.3脂肪氧化的分析189

7.3.1酸价的测定189

7.3.2皂化值的测定190

7.3.3碘价的测定190

7.3.4过氧化值的测定191

7.3.5植物脂肪酸氧化192

7.4脂类酶的分析193

7.4.1脂肪酶的分离纯化及活性测定193

7.4.2脂肪水解酶活性的测定195

7.4.3脂肪氧化酶活性的测定196

7.4.4磷脂酶活性的测定198

7.4.5脂酰基载体蛋白（ACP）的提取199

7.4.6酯酶同工酶的垂直板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分析199

7.4.7酸性磷酸酶的定位研究法201

7.4.8酯酶的分离、纯化与活性测定202

7.5磷脂和糖脂的测定203

7.5.1磷脂的测定203

7.5.2糖脂的测定205

第8章次生物质代谢207

8.1生物碱207

8.1.1吲哚生物碱含量的测定207

8.1.2烟碱含量的测定207

8.1.3喜树碱含量的测定209

8.1.4异胡豆甙（strictosidine）合成酶活性的测定210

8.1.5牻牛儿醇－10－脱氢酶活性的测定211

8.2皂甙212

8.2.1人参皂甙含量的测定212

8.2.2黄芪甲甙含量的测定214

8.2.3茶皂素含量的测定215

8.3萘醌－紫草素含量的测定216

8.4萜217

8.4.1丹参酮含量的测定217

8.4.2紫杉醇含量的测定218

8.4.3倍半萜棉毒素含量的测定219

8.4.4倍半萜合成酶活性的测定220

8.4.5 3－羟基－3－甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）活性的测定220

8.5黄酮222

8.5.1黄酮含量的测定222

8.5.2异黄酮含量的测定222

8.6酚223

8.6.1多酚含量的测定223

8.6.2儿茶素含量的测定224

8.7其他226

8.7.1精油的分析226

8.7.2烟草中焦油含量的测定227

8.7.3缩酚酸含量的测定229

第9章生长与发育231

9.1光敏色素231

9.1.1光敏色素调控反应的鉴定231

9.1.2隐花色素调控反应的鉴定232

9.1.3光敏色素的提取与纯化233

9.1.4光敏色素的测定234

9.1.5获得不同光质辐射的方法235

9.1.6光形态建成236

9.1.7拟南芥种子萌发的光敏色素及激素调控236

9.1.8外源植物激素对拟南芥种子萌发的影响237

9.1.9白芥菜籽苗中的高辐照度反应238

9.1.10蕨类植物孢子体发育中的蓝光反应239

9.2信息传导239

9.2.1植物细胞信号转导研究中常用药理学试剂239

9.2.2植物细胞G蛋白的检测241

9.2.3细胞质中自由钙离子浓度的荧光探针测定法243

9.2.4络合平衡体系中自由钙离子的微机计算方法246

9.2.5疏水亲和层析法纯化钙调素（CaM）248

9.2.6叶绿体类囊体膜磷酸酯酶的提取和测定249

9.2.7 3′－5′－环腺苷酸磷酸二脂酶（PDE）的提取与CaM活性的测定250

9.2.8酶联免疫法（ELISA）测定CaM总量251

9.2.9尼克酸胺腺嘌呤二核苷酸激酶（NAD ase）法定量钙调素252

9.2.10生物素标记钙调素检测钙调素结合蛋白255

9.2.11 蛋白质磷酸化活性的测定256

9.2.12植物细胞壁蛋白的提取和测定258

9.3胚胎和种子发育259

9.3.1拟南芥（Arabidopsis thaliana）的杂交方法259

9.3.2水稻胚胎发育的观察（透明法）261

9.3.3水稻种子储藏蛋白的分离261

9.3.4拟南芥的萌发和培养262

9.4营养器官的生长发育263

9.4.1植物发育过程中组织和器官内几种同工酶的凝胶电泳分析263

9.4.1.1过氧化物酶264

9.4.1.2过氧化氢酶265

9.4.1.3植物酯酶266

9.4.2植物生长的测定（包括瞬时生长的测定）266

9.4.2.1胚芽鞘伸长生长的测定267

9.4.2.2细胞壁延展性的测量267

9.4.2.3与细胞壁离子型结合和共价型结合的过氧化物酶的提取269

9.4.2.4细胞壁中异联酪氨酸的提取和鉴定269

第10章植物激素271

10.1植物激素的提取271

10.2植物激素的测定272

10.2.1毛细管气相色谱法测定脱落酸272

10.2.2气相色谱法测定乙烯、ACC和MACC274

10.2.3气相色谱结合连续流动采气法测定乙烯276

10.2.4气质联用（GCMS）法测定内源赤霉素277

10.2.5高压液相色谱法测定内源细胞分裂素280

10.2.6荧光分光光度法测定吲哚乙酸281

10.2.7植物激素的免疫定量分析283

10.2.7.1固相抗体型ELSA法测定ABA283

10.2.7.2固相抗原型ELISA法测定IAA284

10.3植物激素的生物检定285

10.3.1莴苣种子的发芽试验286

10.3.2莴苣下胚轴的伸长试验286

10.3.3燕麦幼苗芽鞘法287

10.3.4燕麦幼苗伸长生长检定法287

10.3.5水稻幼苗生长试验288

10.3.6α－淀粉酶生物检定法288

10.3.7细胞分裂素的检定289

10.3.8叶绿素生物合成实验289

10.3.9侧芽生长抑制实验290

10.3.10气孔关闭实验291

10.3.11豌豆上胚轴的乙烯反应292

10.3.12黄化水稻幼苗第二叶片弯曲法293

第11章环境和抗逆生理294

11.1植物膜类脂的分析294

11.2植物膜脂脂肪酸的分析297

11.3膜相变与流动性分析298

11.3.1差示扫描量热法298

11.3.2顺磁共振波谱法300

11.3.3荧光分光光度与荧光偏振法301

11.4植物细胞质膜透性的测定302

11.5游离脯氨酸的测定303

11.6甜菜碱含量的测定303

11.7丙二醛的测定305

11.8甜菜碱醛脱氢酶的分离和活性测定306

11.8.1甜菜碱醛脱氢酶的分离纯化306

11.8.2甜菜碱醛脱氢酶活性的测定307

11.9植物体内氧自由基的测定和清除308

11.10热激蛋白的分离纯化309

11.11盐胁迫蛋白的测定311

11.12醇脱氢酶活性及同工酶测定312

11.12.1醇脱氢酶活性的测定313

11.12.2 ADH司工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳313

11.13超氧物歧化酶及其同工酶的活性测定和同工酶显示314

11.13.1 SOD活性的测定314

11.13.2 SOD同工酶的显示315

11.14抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定315

11.14.1抗坏血酸含量的测定315

11.14.2抗坏血酸过氧化物酶（AsA.POD）活性的测定316

11.15多酚氧化酶活性的测定317

11.15.1氧电极法317

11.15.2比色法317

11.16苯丙氨酸解氨酶（PAL）的提取、纯化及活性测定318

11.16.1 PAL的提取——离心和盐析法的应用318

11.16.2 PAL的纯化——分子筛和离子交换层析的应用319

11.16.3 PAL的进一步纯化——亲和层析法的应用321

11.16.4 PAL活性的测定——紫外分光光度计的应用322

11.16.5 PAL纯度的初步鉴定——聚丙烯胺凝胶电泳的应用323

11.17 5′－核苷酸酶活性的测定324

11.18检测植物组织冰冻致死温度的差热分析法325

11.19空间生命科学中几种常用方法327

11.19.1微重力的地面模拟327

11.19.1.1原理327

11.19.1.2回转器回转作用的力学问题327

11.19.1.3常用的回转器330

11.19.2重力感受位点－平衡石的观察331

11.19.3空间重离子辐射的核径迹探测法332

11.19.4细胞染色体损伤的检测方法333

11.19.5测定D3NA损伤的32pi后标记法334

第12章分子生物学336

12.1植物组织中核酸类物质的分离和提取336

12.1.1 DNA的快速分离和提取336

12.1.1.1 SDS法336

12.1.1.2十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法337

12.1.2从含有特殊物质的组织中分离核酸337

12.1.2.1 DNA的分离和提取337

12.1.2.2 RNA的分离和提取339

12.1.3叶绿体中DNA的分离和提取340

12.2植物组织的各种基因转化体系341

12.2.1根癌农杆菌介导的烟草叶块组织转化341

12.2.2根癌农杆菌介导的水稻幼胚转化342

12.2.3真空渗透法转化拟南芥344

12.2.4原生质体的PEG转化法345

12.2.5基因枪导入基因的方法346

12.3植物体内常用报道基因的检测方法347

12.3.1 GUS基因的检测347

12.3.2 CAT基因的检测348

12.3.3 Opine基因的检测349

12.4特定基因的分离和检测方法350

12.4.1 cDNA文库的构建与筛选350

12.4.2转座因子标签法分离植物基因352

12.4.3 PCR方法354

12.4.3.1 PCR的一般方法354

12.4.3.2植物组织的直接PCR356

12.4.4原位杂交356

12.5 EMS诱变法筛选拟南芥突变体358

第13章现代农业技术360

13.1现代温室的特点及其功能简介360

13.2上海型智能温室361

13.3葡萄的快速工厂化育苗364

13.4球茎（根）花卉的花期调节364

13.5促进果实成熟和上色365

13.6用植物生长调节剂保花保果366

13.7岩棉栽培366

13.8基质栽培368

13.9营养液膜370

13.10几种切花的保鲜技术372

附录：374

Ⅰ.植物组织培养常用的几种基本培养基（成分浓度单位rmg/L）374

Ⅱ. 组织培养常用的植物激素、生长调节物质及一些药品376

Ⅲ. 一些常用的缓冲溶液376

Ⅳ. 一般化学试剂的分级379

Ⅴ. 实验中常见化合物的分子量379

Ⅵ. 常用酸、碱和其它化合物的浓度381

Ⅶ. 摩尔数与摩尔浓度381

Ⅷ. 植物生理学中常用计量单位及其换算表382

Ⅸ. 几种蛋白质的物理性质387

Ⅹ. 用于生物研究的放射性同位素387

Ⅺ. 易变质及需要特殊方法保存的试剂389

Ⅻ. 各种冷却剂的组成及冷却效果表389

ⅩⅢ. 酸碱指示剂390

ⅪⅤ. 离心力和离心机转速测算表391

ⅩⅤ. 光的能量单位之间的关系392

ⅩⅥ. 用考马斯亮蓝G250测定蛋白质392

ⅩⅦ.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳394

ⅩⅦ-Ⅰ 垂直板电泳394

ⅩⅦ-Ⅱ双向电泳397

ⅩⅦ-Ⅲ 3H标记蛋白放射自显影399

ⅩⅧ. 平板凝胶的简易快速干燥400

ⅪⅩ.密度梯度超离心技术401

ⅪⅩ-Ⅰ 速率区带技术（rate.zonal）401

ⅪⅩ-Ⅱ 等比重技术（isopycnic）407

ⅩⅩ. 安发马西生物技术公司简介412

ⅩⅪ.华美生物工程公司简介413

ⅩⅫ. 美国贝克曼库尔特公司（BECKMANCOULTER）简介413

ⅩⅩⅢ. 美国Cole-Parmer仪器公司简介413

ⅩⅩⅣ. 美国新布伦兹威克科学仪器公司简介414