《表1 各基因位点siRNA序列》

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《细胞核中的丙酮酸脱氢酶复合体在高糖引起的胰岛素分泌障碍中的作用及机制》

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注:siRNA序列.小干扰RNA序列；E1-siRNA序列.丙酮酸脱氢酶小干扰RNA序列；Scrambled siRNA序列.无关小干扰RNA序列；Sense.正义；Antisense.反义。

将处于对数生长期的β-TC6细胞接种于6孔板，加入新鲜不含抗生素的培养基培养（800μl/孔），待细胞长至90%融合时，预备转染。将200μl无血清DMEM高糖培养基和5μl 20μmol/L对应的siRNA（siRNA序列见表1），800μl无血清DMEM高糖培养基和20μl 1 mg/ml的Lip2000转染试剂分别混合，室温静置5 min。将两种混合液等体积混合，静置20 min，形成Scrambled siRNA-Lip2000和E1 siRNA-Lip2000复合物。将复合物分别加入到6孔板对应培养孔中，于37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养5 h，去除含siRNA培养基，更换完全新鲜的完全高糖培养基，继续培养48 h，形成转染Scrambled siRNA和E1-siRNA的细胞。