《表2 高卢蜜环菌PCR-RFLP条件考察结果》

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《高卢蜜环菌PCR-RFLP快速鉴别方法研究》

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影响高卢蜜环菌的因素主要受PCR扩增和限制性内切酶酶切反应的影响，本文对影响PCR扩增的关键因素退火温度、循环数、DNA浓度以及限制性内切酶时间等进行系统考察，同时考察筛选的条件对不同Taq DNA聚合酶、不同PCR扩增仪的耐受性。结果表明，退火温度位于52～58℃，循环数30～40、DNA模板质量浓度8～200 mg·L-1、Taq酶用量在0.5～2 U时、酶切时间在15～30 min时均可准确鉴别2种高卢蜜环菌，见表2。在此条件下对不同保真度的Taq酶、不同型号PCR仪均具有稳健性。循环数过少（<30）、模板浓度过低（<1 mg·L-1）易产生假阴性结果。