《表2 geNorm软件分析计算各候选基因的表达稳定值 (M)》

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《银杏实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择与验证》


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ge Norm软件分析结果如表2所示,不同条件下候选内参基因的的稳定性排序不同,在对所有样品分析时,这七个内参基因的表达稳定性由高到低的排序为GbACT/GbUBQ>GbGAPDH>GbEF-1α2>GbEF-1α1>Gb18S>Gb26S,可以推测,在银杏中GbACT和GbUBQ是表达较稳定的基因。对不同发育时期雄株叶片分析筛选出的最稳定基因和所有样品的最稳定基因(GbACT)相同。在对不同组织分析时,表达较稳定的基因是GbGAPDH和GbEF-1α2。GbEF-1α1、GbEF-1α2是对不同发育时期雌株叶片分析时最稳定的基因,除不同组织筛选出最不稳定的基因为Gb ACT之外,不同发育时期雌株、雄株及所有样品中不稳定的基因均为Gb18S和Gb26S,预测在银杏中这两个基因表达稳定性不高。通过geNorm软件计算成对变化值(Vn/Vn+1)分析(图4),对不同组织分析时,V2/V3小于临界阈值(0.15),认为在该实验组处理中,需要使用2个内参基因共同作为标准化因子,才能确保定量的准确性。可以选择稳定性排序最高的内参基因Gb GAP-DH和GbEF-1α2作为参考基因,其余值均大于0.15故不做分析。