《表1 微卫星引物序列:胃癌组织COX-2、VEGF、FGF2的表达及其与微卫星不稳定性关系的研究》

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《胃癌组织COX-2、VEGF、FGF2的表达及其与微卫星不稳定性关系的研究》


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应用DNA提取试剂盒提取癌组织及癌旁正常组织基因组DNA,紫外分光光度法定量。DNA抽提具体步骤按照试剂盒说明书进行,研究对象的肿瘤组织基因组与正常组织基因组DNA经电泳后确定提取成功,选取5个微卫星位点:BAT-26、BAT-40、D2S123、D17S250、D5S346,采用同一条件进行扩增,反应体系为20μL,其模板为200ng,引物各15pmol,其中dNTPs 0.5μL,RedTaq DNA聚合酶1.5μL。预变性94℃2.5min,循环参数为94℃45s、55℃60s、72℃90s,35个循环,72℃延伸10min。产物行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,溴化乙锭染色后凝胶成像照相保存,将同一患者的肿瘤组织与正常组织标本所显示的条带进行比较。判定标准:肿瘤组织出现DNA条带而正常组织未出现条带则判断为微卫星不稳定性阳性,阳性标本重复1次,患者出现2个或2个以上微卫星位点为高微卫星不稳定性,出现1个微卫星位点为低微卫星不稳定性,无微卫星位点出现为微卫星稳定性,微卫星位点越多,则说明肿瘤发生途径与微卫星不稳定性越相关。其特异性引物合成序列见表1。