《表3 内参基因表达稳定性综合排序》

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《天府肉鹅母系不同阶段颗粒细胞内参基因的选择》

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利用ΔCT法和qbase+、NormFinder、BestKeeper 3个软件对候选内参基因在9个不同阶段颗粒细胞中的表达稳定性进行分析，结果如图4所示。ΔCT法是通过计算各基因的平均标准偏差（s）来确定内参基因的稳定性，平均标准偏差越小，基因稳定性越高，故最稳定的内参基因为HMBS。qbase+（geNorm）可计算各候选内参基因的表达稳定值（M），M越小，基因稳定性越高。NormFinder与geNorm程序相似，也是根据内参基因表达稳定值（M）大小来判断内参基因的稳定性。根据M值越小，表达越稳定的原则，qbase+和NormFinder 2种方法得到的最稳定内参基因均为SDH。BestKeeper通过计算每个基因之间产生配对的相关系数（r），以标准偏差（s）和变异系数（CV）来判断基因表达的稳定性，相关系数越大，s和CV的值越小，表明基因表达越稳定，当s>1时，则该内参基因表达不稳定，故最稳定的内参基因为18S。用4种方法对内参基因稳定性进行分析所得到的结果不尽相同，因此需要对4种方法得到的结果进行综合排序。对每一个内参基因采用4种方法所得到的排名取几何均数，得到最终的排名，结果见表3。在不同阶段颗粒细胞中，最稳定的3个内参基因依次为SDH、HMBS、18S，而稳定性最差的3个内参基因为UBC、GAPDH、TUB。