《表2 siRNA序列信息》

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《西农萨能奶山羊TRIB3基因克隆及RNA干扰分析》

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按照广州锐博生物科技有限公司siRNA说明书，将siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3以及对照siR-NA（negative control，NC）（序列信息见表2） 用无RNA酶的ddH2O溶解为20μmol/L（储存液），置于-20℃保存。将培养的原代乳腺上皮细胞接种至6孔细胞培养板，培养至汇合度达到80%时进行siRNA转染。配制siRNA转染复合物，转染试剂Lip2000（Thermo，美国）与siRNA储存液体积比为1∶2；在转染复合物孵育间隙，利用胰酶消化细胞；孵育完成后将混合液加入细胞悬液并混匀，终浓度为75 nmol/L。siRNA转染乳腺上皮细胞48 h后收集细胞，提取总RNA并反转录合成cDNA，作为模板用于qRT-PCR分析，检测TRIB3基因干扰对原代乳腺上皮细胞脂代谢相关基因的影响。本实验采用的qRT-PCR引物信息如表1所示；根据本实验室前期对内参基因的筛选与分析结果，选择泛表达转录子（ubiquitously expressed transcript，UXT）为内参基因。