《表3 本文建立的庆大霉素检测方法与其他已报道方法的比较》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《庆大霉素特异性单链DNA适配体的筛选、表征和应用》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

SELEX技术是应用库容量达到1012～1015的随机寡核苷酸文库，结合PCR扩增技术，以指数的方式富集与靶分子高特异性结合的寡核苷酸，最终经过多轮体外筛选获得高特异性、高亲和力的适配体.目前，针对小分子靶标的筛选方法主要有磁珠SELEX、氧化石墨烯SELEX（GO-SELEX）及亲和层析SELEX等.相比其他几种SELEX技术，亲和层析SELEX在操作上虽略复杂，但在高效分离与靶标结合的ssDNA和游离ssDNA方面具有明显的优势，为筛选出高亲和力的适配体提供了更大的可能.本文以庆大霉素为靶标，利用亲和层析SELEX方法，通过九轮筛选，获得了34条与庆大霉素有亲和力的适配体.利用DNAMAN和Mfold软件分别对其同源性和二级结构进行分析，将其分为六大家族，并选择序列较多家族中结构最稳定的序列作为庆大霉素适配体的候选序列.这种方式可以大大降低实验工作量，有利于快速筛选出最优适配体序列，但也有可能遗漏部分具有优良特性的适配体序列.通过荧光分析法测定了5，8，22，26号适配体序列的解离常数，其中26号适配体Kd值达到14.00±3.34 nmol/L，亲和力最大.本文采用亲和层析-SELEX筛选获得的适配体亲和力高于之前用磁珠-SELEX和GO-SELEX所得到的适配体，验证了亲和层析SELEX的优势.同时，特异性实验表明，26号适配体不仅对庆大霉素具有高亲和力，还具有很高的特异性.因此将26号适配选作最佳的庆大霉素适配体，命名为Ap-26.以Ap-26为识别元件构建的AuNPs比色法为庆大霉素提供了一种快速、简便和低成本的检测方法.当庆大霉素的浓度在50～700 nmol/L范围内时，在520 nm处的吸光值与庆大霉素浓度之间存在线性关系，检测限为11.50 nmol/L.将该方法应用于牛奶样品中庆大霉素的检测，结果表明该方法能够成功实现实际样品的检测与已报道的其他方法相比，该方法具有简便、快捷、灵敏度高等优势（表3）.基于Ap-26的AuNPs比色法是一种可以在1 h内完成的凭肉眼观测即可进行半定量分析庆大霉素的方法，为食品安全市场监管和环境监测等提供了有效的手段.