《表1 化合物Ⅰ～Ⅲ的分子量及荧光性质》

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《靶向Aβ聚集体的嘧啶及吡啶荧光探针的生物学评价》

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色谱采用Kromasil C18色谱柱（150mm×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-水（90∶10），流速1.0 m L·min-1，检测波长450 nm。精密称取适量化合物Ⅰ～Ⅲ溶于乙腈中，并用乙腈稀释至1μmol·L-1，取20μL进样，记录色谱图；精密称取3 mmol化合物溶于3 m L乙醇中（超声助溶），取乙醇稀释至终浓度为1～200μmol·L-1，以无水乙醇校准背景，测定紫外吸收系数[21]；精密称取适量化合物溶于乙醇（或PBS）中，并分别用对应溶剂稀释至1μmol·L-1。采用荧光分光光度计进行荧光检测。固定激发/发射波长并于300～700 nm连续扫描发射/激发波长。以罗丹明B为标准对照品（Φ=0.71）测定化合物的荧光量子产率[22]。由表1可知:具有小分子量（小于300 Da）的化合物Ⅰ～Ⅲ，在乙醇和PBS溶液中均表现出了极大的斯托克斯位移（大于100nm），同时表现出了较大的摩尔吸收系数与荧光量子产率（图3、4）。较大的斯托克斯位移、摩尔吸收系数与荧光量子产率能够提高荧光效率，避免探针受背景信号干扰，增强特异性结合能力，是荧光探针筛选的重要指标。其中，化合物Ⅲ的摩尔吸收系数达到了5.0662×104mol·L-1·cm（在PBS中为5.0176×104mol·L-1·cm），3个化合物的量子产率均明显高于ThT（1.00%）[23]。化合物Ⅱ的分子结构中用噻吩环替代了化合物Ⅰ中的苯环，最大发射波长发生了红移（乙醇中16nm；PBS中27 nm）。嘧啶环比吡啶环上多一个氮原子，能够影响氢键结构和质子化作用[21]，故含有嘧啶的化合物Ⅲ与吡啶结构的化合物Ⅰ相比，最大发射波长发生了更为明显的红移（乙醇中49 nm；PBS中47 nm）。