《表1 nir K和nir S基因引物1)》

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《磷差异性调控水稻根际nirK/nirS型反硝化菌组成与丰度》

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1) 上下游引物分别标注为F和R；引物序列Y=C或T，R=A或G，S=C或G，V=A，C或G，D=A，G或T，B=C，G或T，N=A，C，T或G

利用带有8个碱基序列barcode的nirK-F1aCu/R3Cu和nir S-cd3aF/R3cd分别对nir K和nirS基因进行扩增（表1），所用仪器为Eppendorf Mastercycler（Model-5333）.PCR反应体系为50μL，包括上下游引物（10μmol·L-1）各2μL，2×PCR mix（Hot Start PCR Enzyme，Takara）25μL，DNA模板2μL（20 ng·μL-1），ddH2O补至50μL.nir K基因扩增程序为:98℃预变性2 min，30个循环（98℃，10 s；58℃，30 s；72℃，45 s），最后72℃延伸10 min.nirS基因扩增程序为:98℃预变性2min，30个循环（98℃，10 s；54℃，30 s；72℃，45s），最后72℃延伸10 min.